【摘要】：旨在構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)綿羊NYD-SP27基因的BHK-21細(xì)胞株,對NYD-SP27基因的表達(dá)特征進(jìn)行分析,為進(jìn)一步研究NYD-SP27基因功能奠定基礎(chǔ)。本研究克隆綿羊NYD-SP27基因,并將其插入到真核表達(dá)載體pDsRed1-C1中,利用豬捷申病毒2A肽(P2A)將NYD-SP27蛋白和紅色熒光蛋白連接以實(shí)現(xiàn)共表達(dá),將重組質(zhì)粒pDsRed-P2A-Flag-NYDSP轉(zhuǎn)染至BHK-21細(xì)胞中,經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株,利用RT-PCR、間接免疫熒光(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot對NYD-SP27基因的表達(dá)進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明,NYD-SP27基因穩(wěn)定整合至宿主細(xì)胞基因組;NYD-SP27蛋白能夠在BHK-21細(xì)胞中正常表達(dá),分子大小約為63ku;在NYD-SP27蛋白和紅色熒光蛋白翻譯過程中,P2A成功自我剪切。本研究成功構(gòu)建了綿羊NYD-SP27基因的真核表達(dá)載體,建立了穩(wěn)定表達(dá)綿羊NYD-SP27基因的BHK-21細(xì)胞系。
[Abstract]:The purpose of this study was to construct a stable BHK-21 cell line expressing sheep NYD-SP27 gene, and to analyze the expression characteristics of NYD-SP27 gene, and to lay a foundation for further study on the function of NYD-SP27 gene. In this study, sheep NYD-SP27 gene was cloned and inserted into eukaryotic expression vector pDsRed1-C1. The recombinant plasmid pDsRed-P2A-Flag-NYDSP was transfected into BHK-21 cells by ligating NYD-SP27 protein with red fluorescent protein by porcine Jieshen virus 2A peptide (P2A). Stable transgenic cell lines were obtained by G418 screening. The expression of NYD-SP27 gene was identified by RT-PCR, indirect immunofluorescence (Indirect immunofluorescence assay,IFA) and Western blot. The results showed that the NYD-SP27 gene was stably integrated into the host cell genome and expressed normally in BHK-21 cells with a molecular size of about 63ku.The pP2A was successfully shredded during the translation of NYD-SP27 protein and red fluorescent protein. In this study, the eukaryotic expression vector of sheep NYD-SP27 gene was successfully constructed, and a stable BHK-21 cell line expressing sheep NYD-SP27 gene was established.
【作者單位】： 石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31460683)
【分類號】：S826.2

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本文編號：2248826