【摘要】：本試驗(yàn)主要研究河北省石家莊、保定、廊坊、承德、邢臺(tái)、張家口、唐山7個(gè)地區(qū)集約化奶牛場(chǎng)臨床分離的奶牛乳房炎病原菌-金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus S.A)的主要生物學(xué)特性、耐藥性及耐藥基因的相關(guān)性。通過(guò)細(xì)菌生化試驗(yàn)及PCR方法的鑒定,分離出109株乳源金黃色葡萄球菌,按照世界衛(wèi)生組織WHO推薦的Kirby-Bauer菌液涂布法對(duì)109株乳源金黃色葡萄球菌進(jìn)行了38種抗生素的藥物敏感試驗(yàn),結(jié)果顯示：109株乳源金黃色葡萄球菌對(duì)各類抗生素均有不同程度的耐藥,且均表現(xiàn)為多重耐藥,較為敏感的抗生素是頭孢菌素類和氨基糖苷類,其中以頭孢拉定、頭孢氨芐、慶大霉素、阿米卡星、頭孢吡肟、新霉素最為敏感；對(duì)磺胺類藥物、青霉素類、林可胺類、大環(huán)內(nèi)酯類和四環(huán)素類抗生素耐藥嚴(yán)重,其中以磺胺異惡唑、氨芐西林、甲氧胺嘧啶、復(fù)方新諾明、阿莫西林、強(qiáng)力霉素、紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、林可霉素耐藥性最為嚴(yán)重。藥敏試驗(yàn)為河北省區(qū)域內(nèi)奶牛乳房炎的治療提供科學(xué)的用藥依據(jù)和用藥指南。此外,本試驗(yàn)利用PCR技術(shù)對(duì)109株乳源金黃色葡萄球菌進(jìn)行了8類抗生素耐藥基因的檢測(cè),結(jié)果如下：(1)磺胺類耐藥基因sull、su12、sul3陽(yáng)性率分別為45.87%、6.42%、1.83%,有55株細(xì)菌含有該類耐藥基因,總檢出率為50.46%,無(wú)同時(shí)攜帶三種耐藥基因的菌株；(2)四環(huán)素類耐藥基因tetA、tetB、tetC、tetM陽(yáng)性率分別為41.28%、18.35%、43.12%、10.09%,88株細(xì)菌擴(kuò)增出四環(huán)素類耐藥基因,總分離率為80.73%,有1株攜帶4種耐藥基因,21株細(xì)菌未檢出；(3)氨基糖類耐藥基因aac(6')/aph(2")總檢出率為66.97%,另有36株細(xì)菌未攜帶該類耐藥基因；(4)p-內(nèi)酰胺類耐藥基因mecA的陽(yáng)性率為0%,而femA陽(yáng)性率分100%,推導(dǎo)試驗(yàn)菌株對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥機(jī)制主要是由femA基因介導(dǎo)的；(5)大環(huán)內(nèi)酯-林可胺類耐藥基因ermA和ermC的陽(yáng)性率分別為98.17%、62.39%,所有菌株均攜帶此類耐藥基因,總檢出率為100%；(6)喹諾酮類耐藥基因norA,檢出率為59.26%,隨機(jī)選取30株耐喹諾酮類抗生素菌株,對(duì)其進(jìn)行g(shù)rlA與gyrA基因QRDR序列的檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn),grlA基因編碼的第80位氨基酸發(fā)生突變,gyrA基因編碼的第84位氨基酸發(fā)生突變,且有16株發(fā)生了gyrA和grlA雙突變；(7)氯霉素類耐藥基因cmlA、catl、flor其對(duì)應(yīng)的陽(yáng)性率分別為0%、22.02%、33.03%,未帶任何氯霉素類耐藥基因的菌株有55株,占50.46%；(8)糖肽類耐藥基因vanA、vanB陽(yáng)性率分別為66.97%和63.30%,有51株細(xì)菌均攜帶有兩種耐藥基因,占46.79%,未攜帶任何耐藥基因的菌株有13株,占11.93%。以上各類藥物耐藥基因的檢測(cè),揭示了河北省乳源金黃色葡萄球菌主要耐藥性機(jī)制,為河北省乳源金黃色葡萄球菌耐藥性流行病學(xué)的調(diào)查提供了參考數(shù)據(jù)。
[Abstract]:The main biological characteristics of (Staphylococcus aureus S.A, a pathogen isolated from dairy cattle farms in 7 regions of Hebei Province, such as Shijiazhuang, Baoding, Langfang, Chengde, Xingtai, Zhangjiakou and Tangshan, were studied. Relationship between drug resistance and resistance genes. 109 strains of Staphylococcus aureus were isolated by biochemistry test and PCR method. According to the Kirby-Bauer liquid coating method recommended by WHO, the susceptibility tests of 38 kinds of antibiotics to 109 strains of Staphylococcus aureus were carried out. The results showed that 10 9 strains of milk source Staphylococcus aureus had different degrees of resistance to various antibiotics, and all of them showed multidrug resistance. The more sensitive antibiotics were cephalosporins and aminoglycosides, among which cefradine and cefalexin were the most sensitive antibiotics. Gentamicin, amikacin, cefepime, neomycin are the most sensitive; they are highly resistant to sulfonamides, penicillin, linamine, macrolides and tetracyclines, among which sulfamethoxazole, ampicillin, Methoxymine, compound sulfamine, amoxicillin, doxycycline, erythromycin, clarithromycin, azithromycin, lincomycin the most serious drug resistance. The drug sensitivity test provides scientific basis and guidance for the treatment of dairy cow mastitis in Hebei province. In addition, PCR technique was used to detect 8 antibiotic resistant genes in 109 strains of S. aureus from milk source. The results were as follows: (1) the positive rate of sull,su12,sul3 was 45.87% and 6.42% 1.83%, respectively, and 55 strains of bacteria contained these kinds of antibiotic resistance genes. The total positive rate of tetracycline resistance gene tetA,tetB,tetC,tetM was 41.28 and 18.355.The tetracycline resistance gene was amplified from 88 strains of bacteria, and the total detection rate was 50.46, and none of them carried three resistant genes at the same time; (2) the positive rate of tetracycline resistance gene was 41.28 and 18.355.The tetracycline resistance gene was amplified from 88 strains of bacteria. The total isolation rate was 80.73.The total detection rate of aac (6') / aph (2 ") was 66.97, while that of 36 strains of bacteria was not. (4) the positive rate of plactam resistance gene mecA was 0, while the positive rate of femA was 100%. The mechanism of 尾 -lactam antibiotic resistance was mainly mediated by femA gene. (5) the positive rates of ermA and ermC were 98.17% and 62.39%, respectively. (6) the detection rate of quinolone-resistant gene norA, was 59.26. 30 quinolone-resistant antibiotic strains were randomly selected and sequenced by grlA and gyrA gene QRDR. The results showed that the 84th amino acid mutation at the 80th amino acid position encoded by the grlA gene was mutated, and 16 strains had double mutations of gyrA and grlA. (7) the positive rates of chloramphenicol resistance gene cmlA,catl,flor were 0.22.02% and 33.03, 55 strains (50.46%) with no chloramphenicol resistance gene, (8) the positive rate of glycopeptide resistance gene vanA,vanB was 66.97% and 63.30%, respectively. There were 13 strains (11.93%) that did not carry any resistant genes. The detection of drug resistance genes revealed the main mechanism of drug resistance of Staphylococcus aureus in Hebei Province and provided reference data for the epidemiological investigation of drug resistance of Staphylococcus aureus in Hebei Province.
【學(xué)位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.61

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本文編號(hào)：2240925