【摘要】：馬鼻肺炎(Equine rhinopneumonitis)被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為B類動(dòng)物疫病,是由馬皰疹病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。馬皰疹病毒包括馬皰疹病毒I型(Equine herpesvirus I)和馬皰疹病毒IV型(Equine herpesvirus IV)。EHV-IV主要感染上呼吸道。EHV-I可影響多個(gè)器官系統(tǒng),患畜表現(xiàn)為發(fā)熱、食欲不振以及呼吸道等癥狀,有些可引起流產(chǎn)、新生馬駒死亡、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等。雖然感染馬鼻肺炎后死亡率不高,但是其引起的后遺癥會(huì)給馬匹帶來巨大的健康隱患。根據(jù)Genbank上公布的馬皰疹病毒I型(EHV-I)gD基因的序列分別設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物并進(jìn)行擴(kuò)增,獲取的目的基因片段克隆到pMD19-T載體中,將測序鑒定正確的目的基因克隆到真核表達(dá)載體pVAX1上,PCR、酶切及DNA測序結(jié)果證實(shí)成功構(gòu)建了含有馬皰疹病毒I型gD基因的真核表達(dá)載體pVAX1-gD。通過介導(dǎo)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BHK-21細(xì)胞,經(jīng)Western blot證實(shí)基因可在BHK-21細(xì)胞中表達(dá)。隨后將gD重組質(zhì)粒與gD蛋白分別與混合肌肉注射免疫小鼠,檢測一免、二免的小鼠血清中和抗體效價(jià),以及二免后的小鼠淋巴細(xì)胞增殖情況。ELISA與MTT檢測結(jié)果表明,聯(lián)合免疫能有效的誘導(dǎo)特異性血清中和抗體的產(chǎn)生,同時(shí)顯著促進(jìn)了特異性淋巴細(xì)胞的增殖。本研究成功構(gòu)建了pVAX1-gD真核重組質(zhì)粒,并且與pET-30a-gD蛋白聯(lián)合免疫能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較高的體液免疫與細(xì)胞免疫,為馬鼻肺炎基因工程疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Equine rhinopneumonia (Equine rhinopneumonitis) is an acute, feverish and highly contact infectious disease caused by equine herpesvirus by (OIE) of the World Health Organization (OIE). Equine herpesvirus includes equine herpesvirus type I (Equine herpesvirus I) and equine herpesvirus IV type (Equine herpesvirus IV). EHV-IV mainly infects the upper respiratory tract. EHV-I can affect many organ systems. The animals suffer from fever, loss of appetite and respiratory tract symptoms, some of which can cause miscarriage. The death of a newborn foal, neurological diseases, etc. Although the mortality rate is not high, the sequelae can bring great health risks to horses. According to the sequence of equine herpesvirus type I (EHV-I) gD gene published on Genbank, a pair of specific primers were designed and amplified. The obtained target gene fragment was cloned into pMD19-T vector. The correct target gene was cloned into the eukaryotic expression vector pVAX1. The results of restriction endonuclease digestion and DNA sequencing confirmed that the eukaryotic expression vector pVAX1-gD. containing the gD gene of equine herpesvirus type I was successfully constructed. The recombinant plasmid was transfected into BHK-21 cells, and Western blot confirmed that the gene could be expressed in BHK-21 cells. Then the gD recombinant plasmid and gD protein were injected into the mixed muscle to immunize mice respectively. The neutralization antibody titers of the first and second immunized mice were detected, and the lymphocyte proliferation of the mice after the two immunizations. Elisa and MTT showed that: 1. Combined immunity can effectively induce the production of specific serum neutralizing antibodies and promote the proliferation of specific lymphocytes. In this study, pVAX1-gD eukaryotic recombinant plasmid was successfully constructed and combined with pET-30a-gD protein to induce higher humoral and cellular immunity, which laid a foundation for the development of genetic engineering vaccine for equine rhinopneumonia.
【學(xué)位授予單位】：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65

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3 李彬,郭永建;人皰疹病毒6型的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊(cè);2004年06期

4 黃海彬;程安春;汪銘書;;皰疹病毒糖蛋白C的研究進(jìn)展[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2010年02期

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6 向近敏;林雨霖;;皰疹病毒的微生態(tài)問題[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;1990年03期

7 王健;;皰疹病毒誘導(dǎo)的凋亡及其機(jī)制[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊(cè));2001年02期

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9 陳昊;杜麗;;人皰疹病毒7型感染[J];傳染病信息;2004年02期

10 李思經(jīng);;法國Institut Merieux公司計(jì)劃臨床試驗(yàn)皰疹病毒[J];生物技術(shù)通報(bào);1989年07期

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5 黃瑜;程龍飛;李文楊;蘇敬良;莊向生;;鴨皰疹病毒Ⅱ型(暫定名)的分離鑒定[A];第四屆中國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2001年

6 葛菡;程安春;汪銘書;朱德康;羅啟慧;賈仁勇;郭宇飛;陳孝躍;;皰疹病毒胸苷激酶基因的研究進(jìn)展[A];第四屆第九次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（下冊(cè)）[C];2008年

7 鄭之北;吳亦棟;尚世強(qiáng);杜立中;;兒科常見人皰疹病毒的檢測及基因分型[A];2007年浙江省兒科學(xué)、小兒外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

8 周榮;劉文寬;曾文鋌;劉倩;許元生;;皰疹病毒是引起“自疑陰滋病人”癥狀的病原體嗎?[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點(diǎn)研討會(huì)論文集[C];2011年

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3 武漢協(xié)和醫(yī)院皮膚性病科 馮愛平;慎防皰疹病毒侵襲胎兒[N];家庭醫(yī)生報(bào);2005年

4 新華;英國研究用皰疹病毒治腦癌[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2000年

5 呂乃群;嘴起皰說明您累了[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2006年

6 記者邰舉;皰疹病毒感染機(jī)理被發(fā)現(xiàn)[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

7 新訊;皰疹病毒誘發(fā)慢性疲勞[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

8 束梅英;皰疹病毒：癌細(xì)胞的克星[N];中國醫(yī)藥報(bào);2001年

9 本報(bào)特約撰稿人 陳本川;藥物副作用壁壘久攻難破[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

10 王馨立;以毒攻毒[N];文匯報(bào);2000年

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2 齊眉;人皰疹病毒8型重組蛋白的制備和應(yīng)用及其感染的流行病學(xué)調(diào)查[D];山東大學(xué);2006年

3 張晨飛;MDV-1 CVI988疫苗株VP22及UL13蛋白功能初步研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2009年

4 朱洪偉;鴨腸炎病毒UL15及UL41基因的鑒定[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

5 魏榮;兩種重組火雞皰疹病毒rHVT-gB1/EGFP和rHVT-EGFP的構(gòu)建[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

6 秦宇;干擾素調(diào)節(jié)因子7對(duì)人類8型皰疹病毒基因表達(dá)的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

7 馬光剛;馬皰疹病毒Ⅰ型改造活疫苗的構(gòu)建及其作為活載體的應(yīng)用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

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7 李友娟;AngHV ORF51和ORF95基因的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：2238469