【摘要】：為了闡明Smad4基因在水牛卵巢顆粒細(xì)胞增殖及胚胎發(fā)育中的分子機(jī)制,試驗(yàn)采用RT-PCR擴(kuò)增并克隆水牛Smad4基因,對其核苷酸序列和蛋白質(zhì)序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,構(gòu)建Smad4基因的真核表達(dá)載體,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的牛卵巢顆粒細(xì)胞。結(jié)果表明,試驗(yàn)克隆得到水牛Smad4基因編碼序列,編碼區(qū)全長為1 662bp,編碼553個(gè)氨基酸。通過BLAST對水牛Smad4基因的核苷酸序列進(jìn)行同源性比對,結(jié)果顯示,水牛Smad4基因與牛的同源性為99%,與綿羊、豬、馬、人的同源性分別為98%、96%、96%和95%。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明,Smad4基因在不同物種的進(jìn)化過程中具有高度的保守性。試驗(yàn)成功構(gòu)建了水牛Smad4基因的真核表達(dá)載體pEGFP-N1-Smad4,并在水牛卵巢顆粒細(xì)胞中表達(dá)出較強(qiáng)的綠色熒光蛋白Smad4-EGFP融合蛋白。本研究成功克隆了水牛Smad4基因,并成功構(gòu)建了Smad4基因的真核表達(dá)載體,為進(jìn)一步研究Smad4基因在水牛胚胎發(fā)育過程中的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to elucidate the molecular mechanism of Smad4 gene in the proliferation and embryonic development of buffalo ovarian granulosa cells, the buffalo Smad4 gene was amplified and cloned by RT-PCR, and its nucleotide and protein sequences were analyzed by bioinformatics. The eukaryotic expression vector of Smad4 gene was constructed and transfected into bovine ovarian granulosa cells by liposome transfection. The results showed that the encoding sequence of buffalo Smad4 gene was 1662 BP, encoding 553 amino acids. The nucleotide sequence of buffalo Smad4 gene was compared by BLAST. The results showed that the homology of buffalo Smad4 gene with cattle was 99%, and the homology with sheep, pig, horse and human was 98% and 95%, respectively. Phylogenetic tree analysis showed that Smad4 gene was highly conserved in the evolution of different species. The eukaryotic expression vector pEGFP-N1-Smad4, of buffalo Smad4 gene was successfully constructed and a strong green fluorescent protein Smad4-EGFP fusion protein was expressed in buffalo ovary granulosa cells. In this study, the buffalo Smad4 gene was cloned and the eukaryotic expression vector of Smad4 gene was successfully constructed, which laid a foundation for further study on the molecular mechanism of Smad4 gene in the course of buffalo embryo development.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院廣西水牛研究所廣西水牛遺傳繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：廣西科技計(jì)劃項(xiàng)目(桂科AB16380040) 廣西自然科學(xué)基金(2014GXNSFAA118116) 廣西水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局科技項(xiàng)目(桂漁牧科201633052) 廣西水牛研究所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)(水�；�1404004、160204、1705001)
【分類號】：Q78;S823.83

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