【摘要】：【目的】建立一種適用于PPRVN蛋白抗體的間接ELISA檢測方法,應用于PPR防疫.【方法】根據(jù)GenBank中登錄小反芻獸疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列進行人工合成,設(shè)計1對特異引物對N5基因擴增,經(jīng)測序分析后將N5基因片段和原核表達載體pET-32a(+)相連接,成功構(gòu)建pET-32a-N5質(zhì)粒.將pET-32a-N5轉(zhuǎn)化于TransB(DE3)原核表達感受態(tài)細胞后用IPTG誘導表達獲得重組蛋白,經(jīng)SDS-PAGE分析和Western-blot鑒定,重組蛋白分析具有良好的反應原性.【結(jié)果】利用原核表達純化的PPRV N重組蛋白作為包被抗原,初步建立了一種能夠檢測針對PPRV N蛋白抗體的間接ELISA方法.用建立的方法對112山羊份血清進行了抗體檢測,該方法與競爭ELISA試劑盒對比,臨床符合率94.8%.【結(jié)論】該方法具有較好的敏感性、重復性和特異性.
[Abstract]:[objective] to establish an indirect ELISA detection method for PPRVN protein antibody, and to apply it to PPR prevention. [methods] according to the N gene sequence of (PPRV) Nigeria 75 / 1 strain of small ruminant disease virus registered in GenBank, we synthesized it artificially. A pair of specific primers were designed to amplify the N5 gene. After sequencing, the N5 gene fragment was ligated with the prokaryotic expression vector pET-32a (), and the pET-32a-N5 plasmid was successfully constructed. After pET-32a-N5 was transformed into TransB (DE3) prokaryotic expression cells, the recombinant protein was induced by IPTG. The recombinant protein was identified by SDS-PAGE analysis and Western-blot analysis. [results] using prokaryotic expression purified PPRV N recombinant protein as coating antigen, an indirect ELISA method was established to detect antibodies against PPRV N protein. The established method was used to detect the antibody in 112-goat serum. Compared with the competitive ELISA kit, the clinical coincidence rate was 94.80.Conclusion this method has good sensitivity, reproducibility and specificity.
【作者單位】： 甘肅農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院;中農(nóng)威特(天津)生物醫(yī)藥有限責任公司;蘭州市城關(guān)區(qū)動物疫病預防控制中心;中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所;
【基金】：甘肅省科技計劃資助項目(1104NKCA167) 天津市支持科研院所來津發(fā)展項目(16PTYJNC00060)
【分類號】：S855.3

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本文編號：2237209