【摘要】：為建立快速定量檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2b型(PCV2b)抗原含量的方法,本研究采用重組抗PCV2b納米抗體作為捕獲抗體,鼠抗PCV2b單克隆抗體為檢測(cè)抗體,建立了定量檢測(cè)PCV2b的夾心ELISA方法。該方法不僅能夠用于豬圓環(huán)疫苗中PCV2b抗原的檢測(cè),還可用于大腸桿菌或桿狀病毒表達(dá)的PCV2b衣殼蛋白(Cap)亞單位疫苗的檢測(cè),且與其它豬病毒無交叉反應(yīng)。該方法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)PCV2b的線性范圍是104.3TCID50/mL~105.5TCID50/mL,樣品回收率為89.3%~105.6%,該方法批內(nèi)、批間變異系數(shù)小于5%,重復(fù)性好。該方法與間接免疫熒光方法(IFA)檢測(cè)相同樣品時(shí)誤差值小于10%,并且ELISA檢測(cè)結(jié)果離散度更小。分別用兩種方法定量PCV2b抗原,取相同抗原量免疫豬,其誘導(dǎo)產(chǎn)生的PCV2b抗體效價(jià)無顯著差異。本研究構(gòu)建的夾心ELISA方法在定量豬圓環(huán)疫苗中PCV2b抗原方面,與傳統(tǒng)的IFA方法比較其顯示了良好的符合性,并具有更好的重復(fù)性和更短的檢測(cè)周期,是替代IFA方法用于PCV2b定量檢測(cè)的更優(yōu)選擇。
[Abstract]:In order to establish a rapid and quantitative method for quantitative detection of porcine circovirus type 2b (PCV2b) antigen, a sandwich ELISA method for quantitative detection of PCV2b was established by using recombinant anti PCV2b nanometer antibody as capture antibody and mouse anti PCV2b monoclonal antibody as detection antibody. This method can be used not only for the detection of PCV2b antigen in porcine circoid vaccine, but also for the detection of PCV2b capsid protein (Cap) subunit vaccine expressed by Escherichia coli or baculovirus without cross-reaction with other porcine viruses. The linear range of this method for the detection of PCV2b in cell culture was 104.3 TCID50 / mL+ 105.5 TCID50 / mL, and the sample recovery was 89.3% and 105.6.The coefficient of variation between batches of the method was less than 5 and the reproducibility was good. The error value of this method is less than 10 and the dispersion of ELISA detection results is smaller than that of indirect immunofluorescence method (IFA). There was no significant difference in the titer of PCV2b antibody induced by the two methods in immunizing pigs with the same amount of PCV2b antigen. Compared with the traditional IFA method, the sandwich ELISA method proposed in this study showed good conformance with the traditional IFA method in quantifying PCV2b antigen in porcine circoid vaccine, and had better reproducibility and shorter detection period. It is a better alternative to IFA method for quantitative detection of PCV2b.
【作者單位】： 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院國家獸用生物制品工程技術(shù)中心;江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：江蘇省農(nóng)業(yè)自主創(chuàng)新專項(xiàng)[CX(14)2089、CX(15)1026]
【分類號(hào)】：S852.651

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7 楊宗照;豬圓環(huán)病毒2型的檢測(cè)及皂苷類化合物對(duì)核酸疫苗的免疫增強(qiáng)作用[D];浙江大學(xué);2008年

8 劉建波;豬細(xì)環(huán)病毒與豬圓環(huán)病毒2型分子生物學(xué)特性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2014年

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本文編號(hào)：2223827