【摘要】：雞球蟲病是由一類寄生于雞腸道內(nèi)的寄生原蟲所引起的疾病,以雛雞高死亡率和出血性腸炎為主要特征。特別是雞柔嫩艾美耳球蟲病(E. tenella)在雛禽3周齡至2月齡時最易感染,發(fā)病率高達50%-70%,對我國養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的危害。本研究一方面為了尋找與雞E. tenella抗性有關的關鍵基因和關鍵通路,以京海黃雞為試驗動物,在30日齡時高劑量感染柔嫩艾美耳球蟲,采用RNA-seq技術分析感染后第8天感染雞和非感染對照雞盲腸組織的基因組表達水平,對部分差異基因通過qRT-PCR進行了驗證,并對差異基因進行了GO、KEGG富集分析。另一方面為了探明京海黃雞配套系親本的球蟲抗性,研究分別對配套系親本進行了高劑量E. tenella感染、球蟲疫苗免疫和疫苗免疫后高劑量E. tenella感染3個試驗,采用存活率、體增重、卵囊脫落數(shù)、盲腸記分、抗球蟲指數(shù)(ACI)等評價指標及一氧化氮(NO)、過氧化氫(CAT)、γ干擾素(IFN-γ)等10項血漿指標對其雜交配套系親本BB、FF、WW對E. tenella抗性及球蟲疫苗免疫后的免疫效果進行了評價。研究結果如下：1.轉(zhuǎn)錄組測序結果表明,雞E. tenella感染組與對照組共有5477個表達差異顯著的基因(Padj0.05),其中上調(diào)基因有2942個,下調(diào)基因有2535個。選取10個差異基因進行qRT-PCR驗證,結果表明差異基因的表達倍數(shù)與RNA-seq的結果基本一致,說明試驗結果真實可靠。2.GO和KEGG通路的富集分析表明差異基因主要與脂類代謝、細胞交流、炎癥應答、免疫／防御、血管生成、信號轉(zhuǎn)導等有關。雞在應答E. tenella感染的過程中,機體產(chǎn)生了復雜的免疫應答,涉及黏著斑、細胞因子-受體相互作用、過氧化物酶體、細胞外基質(zhì)-受體相互作用、過氧化物酶體增殖物激活受體等信號通路。這些通路中的關鍵差異基因有FAK、TGFB2、TGFB3、IL-6、IL-15、CD36等,這些基因均在宿主抵抗球蟲感染過程中發(fā)揮重要作用。3.京海黃雞雜交配套系親本BB、FF、WW雞在30日齡時高劑量感染E. tenella,感染后8天檢測各項評價指標。其中WW感染組抗球蟲指數(shù)(ACI)值最高為143.1,BB感染組ACI值為142.6,兩者均為抗球蟲低效,FF感染組ACI值最低為119.3,為抗球蟲無效；ACI值與過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、白介素17(IL-17)和干擾素-γ(IFN-γ)4個免疫指標相關顯著(P0.05)；BB感染組NO、白介素2(IL-2)、IL-17、SOD含量顯著高于FF感染組(P0.05)。綜合分析表明：京海黃雞雜交配套親本BB雞對E. tenella抗性顯著高于FF雞,略高于WW雞。4.京海黃雞雜交配套系親本BB、FF雞在9日齡時經(jīng)正典球蟲四價活疫苗免疫,免疫后8天檢測各項評價指標。其中BB雞免疫組CAT、SOD和IL-17的含量顯著高于FF雞免疫組(P0.05)；BB免疫組CAT和SOD含量顯著高于非免疫對照組(P0.05)；FF免疫組CAT和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)含量均顯著高于對照組(P0.05)。綜合分析結果表明BB雞免疫效果優(yōu)于FF雞群體,BB雞E. tenella抗性優(yōu)于FF雞群體。5.京海黃雞雜交配套系親本BB、FF雞在9日齡用兩種球蟲疫苗免疫,免疫后24天進行高劑量感染E. tenella,感染后8天檢測各項指標。綜合臨床表現(xiàn)、盲腸病變、相對增重率及ACI,發(fā)現(xiàn)BB雞群體E. tenella抗性優(yōu)于FF雞群體,免疫1組(500個活卵囊)優(yōu)于免疫2組(正典球蟲疫苗)；CAT、SOD的含量免疫1組雞均顯著高于免疫2組雞(P0.05)；BB雞中,IFN-y含量免疫1組雞顯著高于免疫2組雞(P0.05)；FF雞中,p胡蘿卜素(p-C)含量免疫1組雞顯著高于免疫2組雞(P0.05)。綜合分析表明,500個E. tenella活卵囊免疫效果優(yōu)于正典球蟲疫苗,BB雞群體E. tenella抗性優(yōu)于FF群體。
[Abstract]:Chicken coccidiosis is a disease caused by a class of parasitic protozoa parasitized in chicken intestine. It is characterized by high mortality and hemorrhagic enteritis in chickens. Especially, E. tenella is the most susceptible to infection in chickens from 3 weeks to 2 months of age. The incidence of E. tenella is as high as 50%-70%. It has caused great harm to poultry industry in China. On the one hand, in order to find the key genes and key pathways related to E. tenella resistance in chickens, Jinghai yellow chickens were used as experimental animals. Eimeria tenella was infected at 30 days of age at high doses. RNA-seq technique was used to analyze the genomic expression level in cecum tissues of infected chickens and non-infected control chickens on the 8th day after infection. On the other hand, in order to prove the coccidiosis resistance of the parents of Jinghai Yellow Chicken, three tests were carried out, including high dose E. tenella infection, coccidiosis vaccine immunization and high dose E. tenella infection after vaccine immunization. Oocyst abscission number, cecum score, anti-coccidiosis index (ACI) and 10 plasma indices, such as nitric oxide (NO), hydrogen peroxide (CAT), interferon-gamma (IFN-gamma), were used to evaluate the immune effect of their parents BB, FF, WW on E.tenella resistance and coccidiosis vaccine immunization. The results were as follows: 1. Transcription group sequencing results table There were 5 477 differentially expressed genes (Padj0.05) in E. tenella infection group and control group, including 2 942 up-regulated genes and 2 535 down-regulated genes. Enrichment analysis of the pathway showed that the differentially expressed genes were mainly related to lipid metabolism, cellular communication, inflammatory response, immune/defense, angiogenesis and signal transduction. The key differentially expressed genes in these pathways are FAK, TGFB2, TGFB3, IL-6, IL-15 and CD36. These genes play an important role in host resistance to coccidiosis. 3. The parents BB, FF and WW of Jinghai Yellow Chicken crossbred lines were infected with E.ten at 30 days of age at high doses. The highest ACI value was 143.1 in WW infection group and 142.6 in BB infection group. The lowest ACI value was 119.3 in FF infection group, which was ineffective against coccidiosis. ACI value was associated with catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), interleukin 17 (IL-17) and interferon-gamma (IFN-17). The content of NO, IL-2, IL-17 and SOD in the BB infected group were significantly higher than those in the FF infected group (P The contents of CAT, SOD and IL-17 in the BB immunized group were significantly higher than those in the FF immunized group (P 0.05); the contents of CAT and SOD in the BB immunized group were significantly higher than those in the non-immunized control group (P 0.05); the contents of CAT and GSH-Px in the FF immunized group were significantly higher than those in the control group (P 0.05). The results showed that the immune effect of BB chickens was better than that of FF chickens, and the resistance of BB chickens to E. tenella was better than that of FF chickens. The results showed that E. tenella resistance of BB chickens was superior to that of FF chickens, and the immunization group 1 (500 live oocysts) was superior to that of immunization group 2 (canonical coccidiosis vaccine); the content of CAT and SOD in group 1 was significantly higher than that in group 2 (P 0.05); the content of IFN-y in group 1 was significantly higher than that in group 2 (P 0.05); and the content of p-C in FF chickens was immunized. The immune effect of 500 E.tenella oocysts was better than that of the classical coccidiosis vaccine, and the resistance of E.tenella in BB chickens was better than that of FF chickens.
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S858.31

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本文編號：2219739