【摘要】：為制備哺乳動(dòng)物促卵泡素(FSH)單克隆抗體,比對(duì)了人類、家畜、部分野生動(dòng)物、鼠類等哺乳動(dòng)物FSH氨基酸序列,分析其種間同源性,結(jié)果發(fā)現(xiàn),多種哺乳動(dòng)物FSHβ亞基氨基酸序列的同源性高于80%,且線性抗原表位高度保守。從奶牛垂體組織擴(kuò)增FSHβ亞基CDS片段,構(gòu)建p ET28aFSH重組質(zhì)粒,誘導(dǎo)表達(dá)FSH重組蛋白,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾細(xì)胞與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞融合,間接ELISA法篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞孔,取效價(jià)最高孔進(jìn)行克隆和亞克隆,獲得1株能夠分泌抗FSH的單克隆抗體細(xì)胞株,命名為B4A5。B4A5細(xì)胞株經(jīng)過數(shù)次傳代培養(yǎng)、反復(fù)凍融后生長(zhǎng)狀態(tài)良好,且能夠穩(wěn)定分泌抗體。采用細(xì)胞株體外培養(yǎng)和小鼠腹水誘生法均制備了抗FSH的單克隆抗體,其效價(jià)分別為1∶640、1∶106。分別采用Western blot和間接ELISA法鑒定單克隆抗體的結(jié)合特異性和交叉反應(yīng)性,結(jié)果顯示,制備的單克隆抗體與FSH反應(yīng)呈陽(yáng)性,與促黃體素(LH)、促甲狀腺素(TSH)、促乳素(PRL)、人絨毛膜促性腺激素(h CG)均無交叉反應(yīng)性。綜上,獲得了1株能夠穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,其分泌的單克隆抗體可特異性結(jié)合FSH蛋白。
[Abstract]:In order to prepare mammalian follicle stimulating hormone (FSH) monoclonal antibody, the FSH amino acid sequences of human, domestic animals, some wild animals and mice were compared and their homology was analyzed. The homology of amino acid sequence of FSH 尾 subunit in many mammals was higher than that of 80, and the linear antigen epitope was highly conserved. The FSH 尾 subunit CDS fragment was amplified from the pituitary tissue of dairy cow, the recombinant plasmid of p ET28aFSH was constructed, the recombinant FSH protein was induced to express, the Balb/c mice were immunized, the spleen cells of the immunized mice were fused with SP2/0 myeloma cells, and the positive hybridoma cells were screened by indirect ELISA method. A monoclonal antibody cell line which can secrete FSH was obtained by cloning and subcloning with the highest titer. It was named as B4A5.B4A5 cell line after several passages. After repeated freezing and thawing, the cell line grew well and secreted antibody stably. Monoclonal antibodies against FSH were prepared by cell line culture in vitro and mouse ascites induction method. The titers of monoclonal antibodies against FSH were 1: 640,1: 106, respectively. Western blot and indirect ELISA methods were used to identify the binding specificity and cross-reactivity of monoclonal antibodies. The results showed that the prepared monoclonal antibodies were positive for FSH reaction. There was no cross reactivity with human chorionic gonadotropin (h CG) with luteinizing hormone (LH), thyrotropin (TSH), lactotropin (PRL),). In conclusion, a hybridoma cell strain which can secrete monoclonal antibody stably was obtained. The monoclonal antibody secreted by hybridoma could specifically bind to FSH protein.
【作者單位】： 河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：河南省教育廳高等學(xué)校重點(diǎn)科研計(jì)劃項(xiàng)目(16B230003) 河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院學(xué)術(shù)帶頭人培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目(25000231)
【分類號(hào)】：S814

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