【摘要】：為構(gòu)建表達(dá)羊口瘡病毒(ORFV)B2L基因的重組腺病毒,提取實(shí)驗(yàn)室保存的ORFV AH-F10臨床分離株的病毒核酸,PCR擴(kuò)增B2L基因,將其克隆至穿梭載體中,再將重組穿梭質(zhì)粒pHBAd-ORFV-B2L與骨架載體質(zhì)粒pHBAdBHGloxΔE1利用脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后48h收獲包裝成功的重組腺病毒rAd-ORFV-B2L,對(duì)rAdORFV-B2L進(jìn)行病毒滴度測(cè)定及遺傳穩(wěn)定性鑒定。結(jié)果表明:構(gòu)建獲得的重組腺病毒rAd-ORFV-B2L病毒滴度達(dá)到107.9 TCID50·μL~(-1)。Western-blot檢測(cè)結(jié)果表明rAd-ORFV-B2L在體外能夠表達(dá)B2L蛋白,且能夠與ORFV多抗血清發(fā)生特異性反應(yīng)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,連續(xù)傳代的rAd-ORFV-B2L能夠穩(wěn)定表達(dá)外源蛋白B2L。該研究為后續(xù)腺病毒疫苗的動(dòng)物保護(hù)試驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to construct recombinant adenovirus expressing (ORFV) B2L gene of sheep mouth sore virus, B2L gene was amplified by PCR from clinical isolates of ORFV AH-F10 preserved in laboratory and cloned into shuttle vector. Then the recombinant shuttle plasmid pHBAd-ORFV-B2L and the skeleton vector pHBAdBHGlox 螖 E1 were co-transfected into HEK293 cells with liposome. The recombinant adenovirus rAd-ORFV-B2L, which was successfully harvested and packaged 48 hours after transfection, was used to determine the viral titer of rAdORFV-B2L and to identify its genetic stability. The results showed that the titer of recombinant adenovirus rAd-ORFV-B2L virus reached 107.9 TCID50 渭 L ~ (-1). Western-blot analysis showed that rAd-ORFV-B2L could express B2L protein in vitro, and could react specifically with ORFV multi-antiserum. RT-PCR assay showed that rAd-ORFV-B2L could express B2L protein in vitro. Continuous passage of rAd-ORFV-B2L could stably express exogenous protein B2L. This study laid the foundation for animal protection test of adenovirus vaccine.
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;寧波市疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31602063) 安徽省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(1508085QC60) 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)穩(wěn)定和引進(jìn)人才科研項(xiàng)目(YJ2015-16)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：2216738