【摘要】：為構(gòu)建新型新城疫病毒(NDV)載體疫苗,前期我們將La Sota全長c DNA中的F基因編碼區(qū)替換為基因Ⅶ型NDV的F基因編碼區(qū),并將其裂解位點突變?yōu)槿醵局甑男蛄?構(gòu)建獲得了p NDFLSP-m F重組質(zhì)粒。為探索p NDFLSP-m F是否能夠作為載體有效地表達外源蛋白,在p NDFLSP-m F的P基因與M基因之間引入PmeⅠ酶切位點,并將EGFP基因編碼區(qū)克隆至構(gòu)建好的p NDFLSP-m F載體中,構(gòu)建含有EGFP基因的重組質(zhì)粒p NDFLSP-m F-EGFP。將p NDFLSP-m F-EGFP以及輔助質(zhì)粒p CI-NP-K、p CI-P-K、p CI-LK共轉(zhuǎn)染表達T7 RNA聚合酶的重組痘病毒預(yù)感染的BSR-T7/5細胞,拯救獲得了重組病毒La Sota-m FEGFP。通過RT-PCR證明,被拯救的重組病毒中含有插入的外源基因EGFP。熒光觀察和Western-blot分析結(jié)果表明,EGFP蛋白能在重組病毒中穩(wěn)定表達。生物學(xué)特性測定結(jié)果顯示,La Sota-m F-EGFP具有低毒力毒株特征,MDT為144 h,能夠在雞胚上有效地復(fù)制,EID50為1×108.75/0.1 m L。上述研究結(jié)果為研制和開發(fā)新型NDV載體疫苗奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to construct a novel Newcastle disease virus (NDV) (NDV) vector vaccine, we replaced the F gene coding region of the full-length La Sota c DNA with the F gene coding region of type 鈪，

本文編號：2213484