【摘要】：長期以來,抗生素作為抗病促生長用藥廣泛在畜禽日糧中低劑量長期添加,養(yǎng)殖現(xiàn)場預(yù)防用藥則更加普遍。但近年來,由于耐藥性風(fēng)險和公眾安全意識的提高,尋找安全、有效的新型制劑加以應(yīng)用是當前的首要目標。植物精油來源于天然植物,具有揮發(fā)性和特殊氣味,有多種藥理活性,在醫(yī)藥保健領(lǐng)域已有應(yīng)用,在畜牧業(yè)應(yīng)用才逐漸興起。本研究選用百里香酚、丁香酚、香芹酚、檸檬烯、檸檬醛、肉桂醛、大蒜素7種精油單體為研究對象,采用正交設(shè)計、析因設(shè)計進行最佳抗菌方劑篩選;通過動物飼養(yǎng)試驗對肉仔雞生長性能和屠宰性能進行評估,并測定血清生化指標白蛋白等,以確定適宜添加量;采用MTT法、ELISA法、免疫器官指數(shù)測定等研究復(fù)合植物精油對肉雞免疫功能的影響;建立大腸桿菌O78攻毒肉雞模型,采用微生物培養(yǎng)法、微量凝集法、ELISA法、熒光定量PCR法及制備肉雞心、肝、脾、腎組織病理切片等,研究其對肉用雞抗病力的影響及其免疫學(xué)機制,為生產(chǎn)實踐提供參考依據(jù),并進行現(xiàn)場飼養(yǎng)試驗,確定其經(jīng)濟實用性。結(jié)果顯示:篩選確定精油單體丁香酚、百里香酚、香芹酚為方劑組分,組成方劑為丁香酚3mg、百里香酚3mg、香芹酚2mg。對大腸桿菌MIC為625μg/m L,金黃色葡萄球菌為39μg/m L,沙門菌為19.5μg/m L,對大腸桿菌MBC為1250μg/m L,金黃色葡萄球菌為78μg/m L,沙門菌為39μg/m L;在42天的肉仔雞飼養(yǎng)試驗中,劑量為80mg/kg和160mg/kg的試驗組肉雞平均日增重顯著高于對照組(P0.01),但料肉比顯示80mg/kg組顯著低于對照組(P0.05),160mg/kg組則采食量和料肉比均顯著高于對照組(P0.05);同時胸肌率和腿肌率得到了提高(P0.05);血清總蛋白、白蛋白、尿素氮、甘油三酯、總膽固醇含量差異均不顯著(P0.05),但血清尿素氮、甘油三酯、總膽固醇含量有趨于降低的趨勢;復(fù)合植物精油可以使外周血白細胞和紅細胞含量增加,顯著促進淋巴細胞增殖、增加血清中補體含量、提高新城疫抗體滴度和溶菌酶的水平(P0.05),促進免疫球蛋白和細胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ的分泌(P0.01),肉仔雞血清超氧化歧化酶活性和總抗氧化能力顯著增加(P0.05),并可極顯著提高部分免疫器官指數(shù)(P0.01);在大腸桿菌攻毒肉雞試驗中,添加植物精油降低了肉仔雞死亡率(P0.05),有效減緩體增重降低和料肉比升高,同時,相對于未添加精油攻毒組極顯著降低器官載菌量(P0.01),內(nèi)臟器官病變程度減輕,大腸桿菌攻毒后肉雞血清中IL-6和s TLR4的含量極顯著增加(P0.01),脾臟TLR4和NF-κB的m RNA表達量極顯著提高(P0.01);但添加精油較飼喂基礎(chǔ)日糧的攻毒肉雞血清中IL-6和s TLR4含量顯著降低(P0.05),脾臟TLR4和NF-κB的m RNA表達量極顯著降低(P0.01);養(yǎng)殖應(yīng)用證明,該復(fù)合植物精油可以節(jié)約飼料5%,降低死淘率,每只雞提高經(jīng)濟收益0.9元。結(jié)論如下:本復(fù)合植物精油方劑為丁香酚3mg、百里香酚3mg、香芹酚2mg,對大腸桿菌、沙門菌、金黃色葡萄球菌都有一定的抑殺作用;適宜添加量為80mg/kg飼料;可以增加肉雞的免疫功能;提高其對病原微生物的抗感染水平;而抗炎過程,可能與精油抑制TLR4/NF-κB通路進而抑制炎性細胞因子分泌等免疫應(yīng)答有關(guān);應(yīng)用試驗表明經(jīng)濟實用。綜上所述,本研究篩選所得復(fù)合植物精油可以提高肉仔雞生長性能和抗病力,具有進一步研究和應(yīng)用價值。
[Abstract]:For a long time, antibiotics have been widely used in livestock and poultry diets as disease-resistant and growth-promoting drugs at low doses for a long time, and preventive drug use in farming sites has become more common. Plant, with volatile and special smell, has a variety of pharmacological activities, in the field of medical and health care has been applied in the application of animal husbandry before gradually rising. This study selected thymol, eugenol, carvacrol, limonene, citral, cinnamaldehyde, allicin seven essential oil monomers as the research object, using orthogonal design, factorial design for the best antimicrobial prescription. The effects of compound vegetable essential oils on the immune function of broilers were studied by MTT, ELISA and immune organ index. The broiler model was established by E. coli O78. Microbial culture, microagglutination, ELISA, fluorescence quantitative PCR and pathological sections of heart, liver, spleen and kidney of broiler chickens were used to study their effects on disease resistance of broiler chickens and their immunological mechanism. The results showed that screening and determining essential oil monomer was economical and practical. Eugenol, thymol and carvacrol were the components of the prescription. The prescription was composed of 3 mg eugenol, 3 mg thymol and 2 mg carvacrol. The MIC of E. coli was 625 ug/ml, Staphylococcus aureus was 39 ug/ml, Salmonella was 19.5 ug/ml, E. coli MBC was 1250 ug/ml, Staphylococcus aureus was 78 ug/ml and Salmonella was 39 ug/ml. In broiler feeding experiment, the average daily gain of broilers in the 80 mg/kg and 160 mg/kg dosage groups was significantly higher than that in the control group (P 0.01), but the feed-to-meat ratio showed that the 80 mg/kg group was significantly lower than that in the control group (P 0.05), while the feed intake and feed-to-meat ratio in the 160 mg/kg group were significantly higher than that in the control group (P 0.05); the chest muscle rate and leg muscle rate were also increased (P 0.05). The contents of protein, albumin, urea nitrogen, triglyceride and total cholesterol were not significantly different (P Antibody titer and lysozyme level (P 0.05), promote the secretion of immunoglobulin and cytokines IL-2, TNF-a, IFN-gamma (P 0.01), Broiler Serum Superoxide Dismutase Activity and total antioxidant capacity significantly increased (P 0.05), and can significantly improve the index of some immune organs (P 0.01); in the E. Essential oils decreased mortality (P 0.05), effectively slowed down body weight gain and increased feed-to-meat ratio. Meanwhile, compared with the non-essential oils treated group, the bacterial load of organs was significantly reduced (P 0.01), the degree of visceral organ lesion was alleviated. The levels of IL-6 and s TLR4 in serum, TLR4 and NF-kappa B in spleen were significantly increased (P 0.01). The expression of M RNA in serum was significantly increased (P 0.01), but the contents of IL-6 and s TLR4 in serum were significantly decreased (P 0.05) and the expressions of TLR4 and NF-kappa B in spleen were significantly decreased (P 0.01) compared with those in broilers fed with basal diet. The conclusion is as follows: Eugenol 3 mg, thymol 3 mg, carvacrol 2 mg have certain inhibitory and killing effects on Escherichia coli, Salmonella and Staphylococcus aureus; the appropriate dosage of 80 mg/kg feed; can increase the immune function of broilers; improve its anti-infective level to pathogenic microorganisms; and anti-inflammatory process, Essential oils may be related to the inhibition of TLR4/NF-kappa B pathway and the subsequent inhibition of inflammatory cytokine secretion and other immune responses; application experiments show that it is economical and practical.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S831.5

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本文編號：2211460