【摘要】：為了研究羊痘病毒(capripox virus),制備其毒力因子KLP2的多克隆抗體,試驗(yàn)采用基因同源重組的方法分別構(gòu)建了羊痘病毒兩個(gè)結(jié)構(gòu)域(KLP2-1和KLP2-2)的原核表達(dá)載體并進(jìn)行測(cè)序鑒定。提取質(zhì)粒后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞并用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),目的蛋白采用SDS-PAGE和Western blotting檢測(cè),并用KCl染色切膠純化,純化蛋白加弗氏佐劑免疫家兔,制備的抗體用Western blotting和ELISA檢測(cè)評(píng)價(jià)。結(jié)果表明,試驗(yàn)成功構(gòu)建了表達(dá)載體p ET42b-KLP2-1和p ET42b-KLP2-2,測(cè)序結(jié)果顯示KLP2-1和KLP2-2基因大小分別為657和984 bp,分別表達(dá)了約27和38 ku的蛋白,與理論值相符。切膠純化的蛋白濃度在1~2 mg/m L之間,制備的抗體用Western blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn),蛋白有明顯的特異條帶,ELISA檢測(cè)抗體的效價(jià)均為1∶512。說(shuō)明試驗(yàn)成功表達(dá)了KLP2-1、KLP2-2蛋白,制備了相應(yīng)的多克隆抗體。
[Abstract]:In order to study the preparation of polyclonal antibody to the virulence factor KLP2 of sheep pox virus (capripox virus), the prokaryotic expression vectors of two domains of sheep pox virus (KLP2-1 and KLP2-2) were constructed by homologous recombination and sequenced. The plasmid was extracted and transformed into Escherichia coli BL21 competent cells and expressed by IPTG. The target protein was detected by SDS-PAGE and Western blotting, purified by KCl staining, purified with Freund's adjuvant and immunized with Freund's adjuvant. The prepared antibody was evaluated by Western blotting and ELISA. The results showed that the expression vectors p ET42b-KLP2-1 and p ET42b-KLP2-2 were successfully constructed. The sequencing results showed that the size of KLP2-1 and KLP2-2 genes were 657 and 984bprespectively, and the proteins of about 27 ku and 38 ku were expressed respectively, which were consistent with the theoretical values. The concentration of purified protein was between 1 mg/m / L and 2 mg/m / L, and the titers of the prepared antibodies were 1: 512 by Western blotting detection, and the titers of Elisa were 1: 512. The results showed that KLP2-1 and KLP2-2 protein were successfully expressed and the corresponding polyclonal antibody was prepared.
【作者單位】： 塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院;新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然基金(31360616) 塔里木畜牧科技兵團(tuán)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題(HS201307)
【分類號(hào)】：S852.654

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本文編號(hào)：2189734