【摘要】：為了建立檢測O型口蹄疫病毒不同基因型的雙重?zé)晒舛縍T-PCR方法,本試驗(yàn)根據(jù)口蹄疫病毒O/GX/09-7株和O/XJ/10-11株VP1基因序列設(shè)計(jì)合成1對通用引物和2個(gè)Taqman探針。通過制備GX與XJ株標(biāo)準(zhǔn)品RNA,優(yōu)化反應(yīng)條件,建立雙重?zé)晒舛縍T-PCR,并評價(jià)其靈敏性,特異性、重復(fù)性。利用建立的雙重?zé)晒舛縍T-PCR檢測方法對豬O型FMD疫苗中的GX和XJ株進(jìn)行鑒別檢測,以及對疫苗中病毒RNA含量進(jìn)行定量測定。結(jié)果顯示,檢測GX與XJ株雙重定量RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)分別為R2=0.997和R2=0.995；建立的雙重?zé)晒舛縍T-PCR方法能夠同時(shí)鑒別檢測滅活病毒中口蹄疫病毒不同基因型,具有良好的特異性與靈敏性；RNA含量最低檢測限為10拷貝/μL。應(yīng)用此方法能夠滿足對企業(yè)生產(chǎn)車間的不同批次口蹄疫滅活病毒和種毒的RNA含量進(jìn)行有效的檢測,還可用于種毒的純化檢驗(yàn),并且為疫苗的生產(chǎn)質(zhì)量控制提供了一種新的檢測方法。
[Abstract]:In order to establish a double fluorescent quantitative RT-PCR method for the detection of different genotypes of foot-and-mouth disease virus type O (FMDV), a pair of universal primers and two Taqman probes were designed and synthesized according to the VP1 gene sequences of FMDV O/GX/09-7 and O/XJ/10-11 strains. By preparing GX and XJ strain standard RNAs, optimizing the reaction conditions, establishing double fluorescence quantitative RT-PCRs, and evaluating its sensitivity, specificity and repeatability. The GX and XJ strains of porcine O type FMD vaccine were identified and detected by double fluorescence quantitative RT-PCR assay, and the content of virus RNA in the vaccine was determined quantitatively. The results showed that the correlation coefficient of double quantitative RT-PCR curve between GX and XJ strain was R2O0.997 and R2O0.995.The dual fluorescence quantitative RT-PCR method could identify and detect different genotypes of foot-and-mouth disease virus in inactivated virus simultaneously. The minimum detection limit of RNA content with good specificity and sensitivity was 10 copies / 渭 L. The method can be used to detect the RNA content of inactivated virus and seed virus in different batches of foot-and-mouth disease virus, and can also be used to purify the virus. It also provides a new detection method for the quality control of vaccine production.
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S852.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2189617