【摘要】：為了獲得具有生物學(xué)活性的牛傳染性鼻氣管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gD蛋白特異性單鏈抗體,試驗采用PCR方法擴增雜交瘤細(xì)胞的cDNA單鏈抗體重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)基因,通過重疊延伸PCR及Linker序列獲得完整的單鏈抗體基因,將單鏈抗體基因克隆至桿狀病毒載體pFB-LICBse中,構(gòu)建重組轉(zhuǎn)移載體pFB-VH-VL,將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞中制備重組桿粒rBacmid-VHVL,將重組桿粒rBacmid-VH-VL轉(zhuǎn)染至Sf9細(xì)胞中獲得攜帶單鏈抗體基因的重組桿狀病毒。該重組桿狀病毒在Sf9細(xì)胞中表達(dá)了分子質(zhì)量約為30ku的單鏈抗體蛋白。Western blotting結(jié)果顯示,重組單鏈抗體蛋白能被His標(biāo)簽抗體特異性結(jié)合,也能特異性結(jié)合gD蛋白。間接免疫熒光試驗結(jié)果顯示,該單鏈抗體蛋白能夠識別感染牛腎細(xì)胞MDBK中的IBRV。本研究在昆蟲細(xì)胞中成功表達(dá)了具有識別IBRV的gD蛋白特異性單鏈抗體,為牛傳染性鼻氣管炎的診斷與治療奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to obtain the specific single-chain antibody of bovine infectious rhinotracheitis virus (infectious bovine rhinotracheitis virusus IBRV) GD protein, PCR was used to amplify the heavy chain variable region (VH) and light chain variable region (VL) gene of cDNA in hybridoma cells. Complete scFv gene was obtained by overlapping extension of PCR and Linker sequences. The scFv gene was cloned into baculovirus vector pFB-LICBse. The recombinant transfer vector pFB-VH-VLwas constructed and transformed into Escherichia coli DH10Bac competent cells to prepare rBacmid-VHVL. the recombinant rBacmid-VH-VL was transfected into Sf9 cells to obtain recombinant baculovirus carrying single-chain antibody gene. The recombinant baculovirus expressed scFv protein with molecular weight of about 30ku in Sf9 cells. Western blotting showed that the recombinant scFv protein could be specifically bound by His tag antibody and GD protein. The results of indirect immunofluorescence assay showed that the scFv protein could recognize IBRV in MDBK infected bovine renal cells. In this study, the gd protein specific single-chain antibody was successfully expressed in insect cells to recognize IBRV, which laid a foundation for the diagnosis and treatment of bovine infectious rhinotracheitis.
【作者單位】： 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所畜禽疫病防控技術(shù)北京市重點實驗室;
【基金】：國家重點研發(fā)計劃-畜禽重大疫病防控與高效安全養(yǎng)殖綜合技術(shù)研發(fā)(2016YFD0500900) 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系北京市奶牛創(chuàng)新團(tuán)隊崗位專家資助經(jīng)費項目(bjcystx-ny-3)
【分類號】：S852.65

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