發(fā)布時間：2018-08-08 19:38

【摘要】：絲氨酸整合因子5(Serinc5)是最新報道能夠被攜帶到病毒粒子中的宿主限制性因子,具有抵抗人類免疫缺陷病毒I型(HIV-1)感染性的作用。與人Serinc5(hSerinc5)具有高度同源性的犬Serinc5存在兩種形式,一種為全長基因組編碼的犬Serinc5(cSerinc5),另一種為轉(zhuǎn)錄剪接體(cSerinc5X2),該剪接體在N端缺少1~37位氨基酸。為鑒定這兩種犬Serinc5是否具有抑制HIV-1的復制能力,本研究從犬腎細胞系MDCK中提取犬總RNA,經(jīng)RT-PCR分別擴增兩種犬Serinc5的cDNA,并克隆到pcDNA3.1載體中,構(gòu)建編碼兩種犬Serinc5的重組質(zhì)粒。將這兩種重組質(zhì)粒分別與編碼HIV-1野生型或Nef缺失型的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,收獲所產(chǎn)生的HIV-1病毒粒子,通過ELISA方法檢測到這兩種犬Serinc5對HIV-1病毒粒子的產(chǎn)量無影響。進一步將病毒粒子分別感染TZM-bl細胞,通過熒光強度檢測結(jié)果顯示,與對照組相比,cSerinc5X2對HIV-1感染性無顯著抑制作用,而攜帶cSerinc5的HIV-1感染性與攜帶cSerinc5X2的病毒和對照組相比降低約9倍(p0.01),表明cSerinc5的N端對于病毒感染活性的抑制具有關鍵作用。本研究為鑒定Serinc5抗病毒的功能區(qū)提供實驗依據(jù)。
[Abstract]:Serine integration factor 5 (Serinc5) is a new host restriction factor which can be carried into virus particles. It can resist the infection of human immunodeficiency virus type I (HIV-1). There are two forms of canine Serinc5 with high homology with human Serinc5 (hSerinc5), one is dog Serinc5 (cSerinc5) encoding full-length genome, the other is transcriptional splice (cSerinc5X2). In order to determine whether the two kinds of canine Serinc5 have the ability to inhibit the replication of HIV-1, we extracted the total HIV-1 from the dog kidney cell line MDCK, amplified the cDNAs of two kinds of dog Serinc5 by RT-PCR, cloned them into pcDNA3.1 vector, and constructed the recombinant plasmid encoding two kinds of canine Serinc5. The two recombinant plasmids were cotransfected into 293T cells with HIV-1 wild-type or Nef deletion type plasmids, and the resulting HIV-1 virus particles were harvested. The two kinds of canine Serinc5 were detected by ELISA method to have no effect on the production of HIV-1 virus particles. The virus particles were further infected with TZM-bl cells respectively. The results of fluorescence intensity test showed that cSerinc5X2 had no significant inhibitory effect on HIV-1 infection compared with the control group. The infection of HIV-1 carrying cSerinc5 was about 9 times lower than that of the virus carrying cSerinc5X2 (p0.01), which indicated that the N-terminal of cSerinc5 played a key role in inhibiting the viral infection activity. This study provides experimental evidence for identification of Serinc5 antiviral functional regions.
【作者單位】： 中國農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所-美國密歇根州立大學天然免疫聯(lián)合實驗室獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點實驗室;中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所;
【基金】：黑龍江省自然科學基金面上項目(H201602) 黑龍江省人力資源和社會保障廳留學回國人員擇優(yōu)資助項目(2015424)
【分類號】：S852.65

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本文編號：2172842