【摘要】：為實(shí)現(xiàn)豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)Cap蛋白在酵母中的高效表達(dá),本研究將去除信號(hào)肽并經(jīng)序列優(yōu)化后的PCV2 ORF2片段插入pPICZαA表達(dá)載體,將重組表達(dá)質(zhì)�？寺∞D(zhuǎn)化巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)X33感受態(tài)細(xì)胞中,應(yīng)用Zeocin抗性和PCR法對(duì)轉(zhuǎn)化子進(jìn)行初步篩選和表型鑒定,利用"雙膜法"篩選出PCV2 Cap表達(dá)量相對(duì)較高的酵母。采用正交試驗(yàn)對(duì)優(yōu)選的酵母進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn),分析培養(yǎng)基pH、甲醇誘導(dǎo)時(shí)間、甲醇誘導(dǎo)濃度和誘導(dǎo)時(shí)酵母濃度對(duì)PCV2重組Cap蛋白(rCap)分泌表達(dá)的影響。結(jié)果顯示酵母分泌表達(dá)PCV2 rCap的優(yōu)化條件為:培養(yǎng)基pH為5.0,發(fā)酵液OD600nm至1.0,加入終濃度1.0%甲醇誘導(dǎo)96 h。優(yōu)化后的PCV2 rCap分泌量可達(dá)207.58μg/m L。中和試驗(yàn)結(jié)果顯示,發(fā)酵產(chǎn)物PCV2 rCap免疫小鼠產(chǎn)生的抗體可有效中和PCV2。本研究為利用酵母表達(dá)PCV2 Cap進(jìn)行疫苗研制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to achieve high expression of porcine circovirus type 2 (PCV2) Cap protein in yeast, the signal peptide was removed and sequenced PCV2 ORF2 fragment was inserted into pPICZ 偽 A expression vector. The recombinant expression plasmid was cloned into Pichia pastoris (Pichia pastoris) X33 competent cells. The transformants were preliminarily screened and phenotypic identified by Zeocin resistance and PCR method. Yeast with relatively high PCV2 Cap expression was screened by "double membrane method". Orthogonal experiment was used to study the effects of medium pH, methanol induction time, methanol concentration and yeast concentration on the secretion and expression of PCV2 recombinant Cap protein (rCap). The results showed that the optimal conditions for yeast secretion and expression of PCV2 rCap were as follows: medium pH 5.0, fermentation broth OD600nm to 1.0, and final concentration 1.0% methanol for 96 h. The optimized PCV2 rCap secretion can reach 207.58 渭 g / mL. Neutralization test showed that the antibody produced by PCV2 rCap immunized mice was effective in neutralizing PCV2. This study laid a foundation for vaccine development using yeast expressed PCV2 Cap.
【作者單位】： 廣東海大畜牧獸醫(yī)研究院;
【基金】：基金項(xiàng)目:豬用疫苗生產(chǎn)新工藝及產(chǎn)業(yè)化關(guān)鍵技術(shù)的研發(fā)(2017YFD0500604)
【分類號(hào)】：S852.651

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本文編號(hào)：2170045