【摘要】：本研究通過分離培養(yǎng)豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞和肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞,利用骨骼肌細(xì)胞和肌內(nèi)脂肪細(xì)胞間接共培養(yǎng)、重組肌聯(lián)素處理肌內(nèi)脂肪細(xì)胞等技術(shù)手段,研究肌肉細(xì)胞對肌內(nèi)脂肪細(xì)胞分化,肌聯(lián)素對肌內(nèi)脂肪細(xì)胞分化、脂肪細(xì)胞中脂肪酸攝取、轉(zhuǎn)運和利用的影響。試驗獲得以下結(jié)果:1.為了研究豬骨骼肌細(xì)胞對肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞分化的影響,利用豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞和肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞共培養(yǎng),分別誘導(dǎo)分化,檢測肌內(nèi)脂肪細(xì)胞分化水平、脂肪細(xì)胞分化標(biāo)志基因的表達(dá)以及脂代謝關(guān)鍵酶的表達(dá)。結(jié)果表明:與肌內(nèi)脂肪細(xì)胞單獨培養(yǎng)相比,共培養(yǎng)體系中1)肌內(nèi)脂肪細(xì)胞脂滴數(shù)量和脂滴面積顯著減少(P0.05);2)肌內(nèi)脂肪細(xì)胞增殖分化標(biāo)志基因PPARγ和C/EBPα的表達(dá)量極顯著下降(P0.01);3)肌內(nèi)脂肪細(xì)胞ACC、FAS的表達(dá)水平極顯著下降(P0.01);4)骨骼肌細(xì)胞內(nèi)肌聯(lián)素的基因表達(dá)水平隨時間而極顯著地增加。2.為了研究重組肌聯(lián)素對肌內(nèi)脂肪細(xì)胞利用外源游離脂肪酸的調(diào)控作用,試驗采用重組肌聯(lián)素和脂肪酸單獨或共同處理豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞,研究肌聯(lián)素對肌內(nèi)脂肪細(xì)胞分化、肌內(nèi)脂肪細(xì)胞攝入外周游離脂肪酸的能力、脂質(zhì)合成與分解代謝以及脂肪細(xì)胞線粒體脂肪酸氧化的影響,檢測肌內(nèi)脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基中游離脂肪酸的含量、肌內(nèi)脂肪細(xì)胞脂肪酸轉(zhuǎn)運相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)及其作用的信號通路。結(jié)果表明:1)肌聯(lián)素單獨作用能極顯著降低肌內(nèi)脂肪細(xì)胞的脂滴數(shù)量和脂滴面積(P0.01),并極顯著地促進(jìn)對游離脂肪酸的吸收(P0.01);2)肌聯(lián)素單獨處理或與棕櫚酸共同處理,能顯著提高肌內(nèi)脂肪細(xì)胞中脂肪酸轉(zhuǎn)運相關(guān)因子FATP1、FABP4的表達(dá)水平(P0.05);3)肌聯(lián)素單獨處理或與棕櫚酸共同處理后顯著提高肌內(nèi)脂肪細(xì)胞HSL、LPL的表達(dá)量(P0.05);4)肌聯(lián)素通過激活p38MAPK信號通路調(diào)節(jié)脂肪酸轉(zhuǎn)運和脂代謝。3.為了研究重組肌聯(lián)素對豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞中脂肪酸氧化的影響,試驗采用重組肌聯(lián)素處理豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞,檢測線粒體中與脂肪酸氧化相關(guān)的標(biāo)志因子和蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明:1)肌聯(lián)素能顯著提高肌內(nèi)脂肪細(xì)胞線粒體中脂肪酸氧化標(biāo)志因子TFAM、UCP1的表達(dá)水平(P0.05);2)肌聯(lián)素顯著提高了肌內(nèi)脂肪細(xì)胞線粒體中氧化呼吸鏈標(biāo)志蛋白復(fù)合物Ⅰ的表達(dá)水平(P0.05)。綜上所述,本研究證明豬骨骼肌細(xì)胞對肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞分化具有抑制作用;肌聯(lián)素能抑制肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞分化;肌聯(lián)素可促進(jìn)豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞對外源脂肪酸的攝取及轉(zhuǎn)運;肌聯(lián)素對豬肌內(nèi)脂肪細(xì)胞線粒體的脂肪酸氧化具有促進(jìn)作用。
[Abstract]:In this study, porcine skeletal muscle satellite cells and intramuscular precursor adipocytes were isolated and cultured. Indirect co-culture of skeletal muscle cells and intramuscular adipocytes was carried out. To study the effects of muscle cells on intramuscular adipocyte differentiation, myopectin on intramuscular adipocyte differentiation, fatty acid uptake, transport and utilization in adipocytes. The results of the experiment are as follows: 1. In order to study the effect of porcine skeletal muscle cells on the differentiation of intramuscular preadipocytes, porcine skeletal muscle satellite cells and intramuscular precursor adipocytes were co-cultured to induce differentiation and detect the differentiation level of intramuscular adipocytes. The expression of adipocyte differentiation marker gene and lipid metabolism key enzymes. The results showed that compared with intramuscular adipocyte culture alone, In co-culture system 1) the number and area of lipid droplets in intramuscular adipocytes were significantly decreased (P0.05) and the expression of C/EBP 偽 and PPAR 緯 were significantly decreased (P0.01) 3) the expression level of ACC-FAS in intramuscular adipocytes was extremely significant. (P0.01) 4) the gene expression level of sarcopectin in skeletal muscle cells increased significantly with time. In order to study the effect of recombinant sarcopectin on the utilization of exogenous free fatty acids in intramuscular adipocytes, the effects of recombinant myonectin and fatty acids on the differentiation of intramuscular adipocytes were studied. The ability of intramuscular adipocytes to ingest peripheral free fatty acids, the effects of lipid synthesis and catabolism, and the oxidation of fatty acids in mitochondria of adipocytes were measured. Expression of fatty acid transporter related genes and proteins in muscle adipocytes and signal pathway of their action. The results showed that the concentration of lipid droplets and lipid drop area (P0.01) in muscle adipocytes were significantly decreased by the action of 1: 1), and the absorption of free fatty acids (P0.01) 2) was promoted by the treatment of myopectin alone or in combination with palmitic acid. The expression level of FABP4 in intramuscular adipocytes was significantly increased (P0.05). (P0.05) the expression of HSL-LPL in intramuscular adipocytes was significantly increased (P0.05). (P0.05) the expression of HSL-LPL in intramuscular adipocytes was significantly increased (P0.05) by activation of p38MAPK signal by myopectin alone or in combination with palmitic acid. Pathway No.3 regulates fatty acid transport and lipid metabolism. In order to study the effect of recombinant sarcopectin on fatty acid oxidation in porcine intramuscular adipocytes, the expression of markers and proteins related to fatty acid oxidation in mitochondria was detected by using recombinant myosin to treat porcine intramuscular adipocytes. The results showed that the expression of TFAM- UCP1 in mitochondria of intramuscular adipocytes was significantly increased (P0.05). The expression of oxidative respiratory chain marker protein complex I in mitochondria of intramuscular adipocytes was significantly increased (P0.05). To sum up, this study demonstrated that porcine skeletal muscle cells can inhibit the differentiation of intramuscular precursor adipocytes, that sarcopectin can inhibit the differentiation of intramuscular preadipocytes, and that sarcopectin can promote the uptake and transport of exogenous fatty acids by porcine muscle adipocytes. Adiponectin promotes fatty acid oxidation in mitochondria of porcine intramuscular adipocytes.
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S828

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本文編號：2160593