【摘要】：豬鏈球菌2型是一種人畜共患病原。該病原不僅給全球的養(yǎng)豬業(yè)造成了非常大的經(jīng)濟(jì)損失,而且危害人類的公眾健康安全。目前人們對(duì)豬鏈球菌2型的致病機(jī)理研究并不透徹。針對(duì)該病的預(yù)防,我國(guó)所生產(chǎn)的疫苗均為滅活疫苗。隨著生物信息學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和完善,利用反向疫苗學(xué)開發(fā)豬鏈球菌2型基因工程亞單位疫苗便具備了理論基礎(chǔ)。本研究通過對(duì)GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的豬鏈球菌2型P1/7株全基因序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析,從1883多個(gè)開放性閱讀框(ORF)中篩選出39個(gè)候選保護(hù)性抗原基因,但是MRP基因在實(shí)驗(yàn)室所分離的毒株中檢出率低,因此對(duì)剩余的38個(gè)候選抗原進(jìn)行了基因克隆。其中編號(hào)為23、24、26、28、33、34、35、36、38、39所對(duì)應(yīng)的抗原分子量較大,因此進(jìn)行了節(jié)段表達(dá)。共構(gòu)建了58個(gè)重組質(zhì)粒。經(jīng)過SDS-PAGE電泳鑒定后,共表達(dá)了43個(gè)。將所純化到的35個(gè)候選抗原免疫小鼠,以本實(shí)驗(yàn)室分離鑒定的豬鏈球菌2型CZ-XXL200毒株進(jìn)行攻毒,并通過檢測(cè)各組之間第36h血液中細(xì)菌含量,第72h體重變化,第5天脾臟與體重的比值進(jìn)行免疫效果評(píng)估。通過重復(fù)實(shí)驗(yàn)最終獲得5個(gè)保護(hù)效果優(yōu)良的保護(hù)性抗原,其名稱與編號(hào)分別為：Sao (Z-29)、Surface protein (Z-35)、hypothetical protein (Z-39)、hypothetical protein (Z-21)、ABC transporter protein (Z-13)。本研究進(jìn)一步證實(shí)了SAO對(duì)豬鏈球菌2型具有較好的保護(hù)效果,同時(shí)也首次發(fā)現(xiàn)了另外4個(gè)具有一定保護(hù)效果的保護(hù)性抗原,其中Z-39和Z-21均一直被認(rèn)為是假定蛋白。通過對(duì)5個(gè)保護(hù)性抗原的基因序列進(jìn)行Blast分析,發(fā)現(xiàn)保護(hù)效果最好的SAO和Surface protein (Z-35)基因存在于豬鏈球菌多個(gè)血清型全基因組中,這兩個(gè)保護(hù)性抗原不僅適用于豬鏈球菌2型基因工程亞單位疫苗的抗原,而且可能對(duì)多個(gè)血清型具有交叉保護(hù)效果。該研究為豬鏈球菌2型基因工程亞單位疫苗的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Streptococcus suis type 2 is a zoonotic pathogen. The pathogen not only causes great economic loss to the pig industry in the world, but also endangers the public health and safety of human beings. At present, the pathogenesis of Streptococcus suis type 2 is not well studied. For the prevention of the disease, all the vaccines produced in China are inactivated vaccines. With the development and improvement of bioinformatics technology, the development of Streptococcus suis type 2 gene engineering subunit vaccine by reverse vaccinology has a theoretical foundation. In this study, 39 candidate protective antigen genes were screened from more than 1883 open reading frames (ORF) by bioinformatics analysis of the whole gene sequence of Streptococcus suis type 2 P1 / 7 strain in GenBank database. However, the detection rate of MRP gene was low in the strains isolated in laboratory, so the remaining 38 candidate antigens were cloned. The corresponding molecular weight of the antigens numbered 23 ~ (24) ~ (26) ~ (28) ~ (3) ~ (3) ~ (3) ~ (3) ~ (3) ~ (3) ~ (3) ~ (39) ~ (3) ~ (35) ~ (35) ~ (36) ~ ( A total of 58 recombinant plasmids were constructed. A total of 43 were identified by SDS-PAGE electrophoresis. 35 candidate antigens were purified to immunize mice. The strains of Streptococcus suis type 2 CZ-XXL200 were isolated and identified in our laboratory. The bacterial content in blood and body weight at the 36th hour and 72h were detected. The immune effect was evaluated by the ratio of spleen to body weight on day 5. Five protective antigens with good protective effect were obtained by repeated experiments. The names and numbers of the protective antigens were: protein (Z-35) and hypothetical protein (Z-39) / hypothetical protein (Z-21) / ABC transporter protein (Z-13). This study further confirmed that SAO has a good protective effect on Streptococcus suis type 2. At the same time, four other protective antigens have been found for the first time, among which Z-39 and Z-21 have been considered as hypothetical proteins. By Blast analysis of five protective antigens, it was found that the best protective SAO and Surface protein (Z-35 genes were found in the whole genome of several serotypes of Streptococcus suis. These two protective antigens are not only suitable for the antigen of Streptococcus suis type 2 genetic engineering subunit vaccine, but also may have cross-protective effect on multiple serotypes. This study laid a foundation for the development of genetic engineering subunit vaccine of Streptococcus suis type 2.
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.611

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本文編號(hào)：2155493