【摘要】：驗證整合于山羊β-乳球蛋白基因座的豬瘟病毒E0(CSFV E0)基因是否能夠利用內源性啟動子調控該基因表達,為制備轉CSFV E0基因山羊做好準備。利用脂質體轉染的方法將實驗室已構好的針對山羊β-乳球蛋白基因第一外顯子的TALENs表達載體和包含CSFV E0基因的打靶載體共轉染山羊乳腺上皮細胞,用藥物(G418)進行篩選獲得單克隆,并對獲得的克隆進行5′端和3′端鑒定,鑒定都為陽性的克隆進行激素誘導24h后,收集培養(yǎng)液和細胞。通過RT-PCR和Western blot技術檢測證明,轉基因陽性細胞能夠表達并分泌出CSFV E0蛋白。本試驗為以轉CSFV E0基因細胞為供核體進行核移植制作轉基因動物奠定了基礎。
[Abstract]:To verify whether the CSFV E0 gene integrated into goat 尾 -lactoglobulin locus could regulate the expression of the gene by endogenous promoter, so as to prepare the transgenic goat with CSFV E0 gene. Goat mammary epithelial cells were co-transfected into goat mammary epithelial cells by liposome transfection of TALENs expression vector targeting goat 尾 -lactoglobulin gene exon 1 and targeting vector containing CSFV E0 gene. The clones were screened by G418 and identified at 5 'and 3' ends. The positive clones were induced by hormone for 24 hours, and the culture medium and cells were collected. The results of RT-PCR and Western blot showed that the transgenic cells could express and secrete CSFV E0 protein. This study laid a foundation for the preparation of transgenic animals using CSFV E0 gene cells as nuclear donor.
【作者單位】： 西北農林科技大學動物醫(yī)學院;
【基金】：戰(zhàn)略性新興產業(yè)重大產品(群)項目(農業(yè)領域)(2015KTCQ02-18)
【分類號】：S852.65

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本文編號：2154904