發(fā)布時間：2018-07-31 07:45

【摘要】：驗(yàn)證整合于山羊β-乳球蛋白基因座的豬瘟病毒E0(CSFV E0)基因是否能夠利用內(nèi)源性啟動子調(diào)控該基因表達(dá),為制備轉(zhuǎn)CSFV E0基因山羊做好準(zhǔn)備。利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法將實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)好的針對山羊β-乳球蛋白基因第一外顯子的TALENs表達(dá)載體和包含CSFV E0基因的打靶載體共轉(zhuǎn)染山羊乳腺上皮細(xì)胞,用藥物(G418)進(jìn)行篩選獲得單克隆,并對獲得的克隆進(jìn)行5′端和3′端鑒定,鑒定都為陽性的克隆進(jìn)行激素誘導(dǎo)24h后,收集培養(yǎng)液和細(xì)胞。通過RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測證明,轉(zhuǎn)基因陽性細(xì)胞能夠表達(dá)并分泌出CSFV E0蛋白。本試驗(yàn)為以轉(zhuǎn)CSFV E0基因細(xì)胞為供核體進(jìn)行核移植制作轉(zhuǎn)基因動物奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:To verify whether the CSFV E0 gene integrated into goat 尾 -lactoglobulin locus could regulate the expression of the gene by endogenous promoter, so as to prepare the transgenic goat with CSFV E0 gene. Goat mammary epithelial cells were co-transfected into goat mammary epithelial cells by liposome transfection of TALENs expression vector targeting goat 尾 -lactoglobulin gene exon 1 and targeting vector containing CSFV E0 gene. The clones were screened by G418 and identified at 5 'and 3' ends. The positive clones were induced by hormone for 24 hours, and the culture medium and cells were collected. The results of RT-PCR and Western blot showed that the transgenic cells could express and secrete CSFV E0 protein. This study laid a foundation for the preparation of transgenic animals using CSFV E0 gene cells as nuclear donor.
【作者單位】： 西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;
【基金】：戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)重大產(chǎn)品(群)項(xiàng)目(農(nóng)業(yè)領(lǐng)域)(2015KTCQ02-18)
【分類號】：S852.65

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本文編號：2154904