發(fā)布時間：2018-07-26 20:01

【摘要】：采用對應(yīng)于鴨疫里默菌16SrRNA基因442~461bp序列的5條特異引物,建立了環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)反應(yīng)體系,加入試劑盒提取的鴨疫里默菌DNA后,置63℃反應(yīng)60min,通過監(jiān)測反應(yīng)液濁度判斷結(jié)果。在此基礎(chǔ)上,用煮沸10min的方法代替試劑盒提取DNA方法,并用顯色方法代替濁度檢測和瓊脂糖凝膠電泳方法判斷結(jié)果,通過敏感性、特異性、病原消長規(guī)律試驗驗證方法的準(zhǔn)確性。另外,對臨床采集的135只患病鴨的心血、腦組織、肝臟和心臟共540份樣品提取DNA后,用LAMP和PCR進(jìn)行檢測,同時進(jìn)行細(xì)菌分離和鑒定,比較各種方法檢測結(jié)果的符合率。結(jié)果顯示,菌液提取DNA后,LAMP和PCR方法最低分別可檢測到2和10個CFU的鴨疫里默菌。菌液煮沸代替試劑盒提取DNA方法,使LAMP的敏感性降低5倍。顯色法、濁度檢測和瓊脂糖凝膠電泳方法判斷結(jié)果的敏感性和特異性相同。細(xì)菌分離法共獲得201株鴨疫里默菌,且經(jīng)LAMP與PCR法檢測均呈陽性,LAMP與PCR法檢出陽性樣本總數(shù)分別為271和254份,LAMP方法陽性檢出率高于PCR方法。建立的鴨疫里默菌LAMP檢測方法具有較高的敏感性,進(jìn)一步用菌液煮沸方法代替DNA提取法雖然使敏感性降低5倍,但節(jié)省了DNA提取步驟,再結(jié)合顯色技術(shù)使反應(yīng)結(jié)果直觀可見,使其臨床應(yīng)用更加便捷。
[Abstract]:Using five specific primers corresponding to the 442~461bp sequence of 16SrRNA gene of Riemer duck, an isothermal amplified (LAMP) reaction system was established. After adding the DNA extracted from the kit, the reaction was carried out at 63 鈩，

本文編號：2147133