【摘要】：新城疫(Newcastle disease, ND)的高致死性仍然是對世界各國養(yǎng)殖業(yè)的重大危害,隨著發(fā)展中國家疫苗免疫為主的政策實施,疫苗得以廣泛應(yīng)用,新城疫的流行一定程度上得到控制,但其流行趨勢卻在發(fā)生改變：流行基因發(fā)生改變、宿主范圍不但擴大、非典型性新城疫越來越普遍等。研究新城疫的分子流行病學,評估其流行特點和新城疫病毒的局部傳播意義重大。為了解環(huán)洞庭湖地區(qū)新城疫的感染分布情況,本文通過對2013-2014年洞庭湖地區(qū)養(yǎng)禽場新城疫病原監(jiān)測采樣,采用雞胚分離及血清學鑒定,分離到51株新城疫病毒,其中雞源34株,鴨源2株,環(huán)境15株。選取不同時間、不同地點和宿主的16株代表毒株,采用R T-PCR方法擴增F基因和HN基因片段,并將擴增產(chǎn)物純化后克隆于PMD18-T Easy Vector載體中進行測序,與Genbank中發(fā)表的參考序列進行遺傳進化分析比對,結(jié)果表明1株NDV分離株屬于Class Ⅱ基因Ⅱ型,F蛋白裂解位點的氨基酸序列為112GRQGRL117,屬于疫苗類毒株；其余15株均為Class I基因3型,F蛋白裂解位點的氨基酸序列為I12ERQERL117, Class I各分離毒株之間F蛋白同源性在97.8%以上HN蛋白同源性在98.2%以上,與參考毒株吉林野鳥毒株J36/13的遺傳關(guān)系最近。對洞庭湖周邊地區(qū)活禽市場分離到的48株NDV(34株為雞源病毒,4株鴨源病毒,1株鴿源病毒,9株分離自環(huán)境樣本)測序及遺傳進化分析,結(jié)果分為Class Ⅰ和Class Ⅱ兩大類。其中Class Ⅰ毒株共41株,占樣品分離率的3.66%,占總分離率的85.42%株,均為基因3型；Class Ⅱ毒株共7株,占樣品分離率的0.62%,占總分離率的14.58%,包括基因Ⅰ型1株,基因Ⅱ型5株,基因Ⅵ型1株。據(jù)研究報道,Class Ⅰ這類弱毒株起初是來源于水禽,本文研究的Class Ⅰ毒株中的雞源毒株占75.6%(31/41),鴨源毒株占2.4%(1/41),且均與野鳥毒株J36/13的同源性在97.4%以上,說明Class Ⅰ這類弱毒株存在水禽、家禽和野禽之間相互傳播的可能。綜合全文監(jiān)測結(jié)果分析表明：環(huán)洞庭湖地區(qū)Class Ⅰ新城疫毒株在禽群中帶毒率高,超過疫苗株和強毒株的帶毒率；環(huán)境來源毒株多,存在一定的病毒污染擴散；主要流行毒株為Class Ⅰ基因3型,與野鳥毒株的遺傳親緣關(guān)系最近,分析可能來自同一毒株來源,所以,對洞庭湖區(qū)新城疫的病原監(jiān)測及分子流行病學的研究工作還需高度重視。
[Abstract]:The high death rate of Newcastle disease (ND) is still a major harm to the breeding industry in the world. With the policy of vaccine immunization in developing countries, the vaccine is widely used and the epidemic of Newcastle disease is controlled to some extent, but the trend of the epidemic is changing: the change of the epidemic gene and the host range Not only expanded, and atypical Newcastle disease was becoming more and more common. The molecular epidemiology of Newcastle disease was studied, and its epidemic characteristics and local transmission of Newcastle disease virus were significant. In order to solve the infection distribution of Newcastle disease in the Dongting Lake area, this paper sampled the new town blight of the poultry farm in the Dongting Lake area for 2013-2014 years. 51 strains of Newcastle disease virus were isolated with chicken embryo isolation and serological identification, of which 34 strains of chicken, 2 ducks and 15 environment. 16 strains of F and HN genes were selected at different time, different locations and host. The F gene and HN gene fragments were amplified by R, and the amplified products were cloned in PMD18-T Easy Vector vector and were sequenced, and Gen The reference sequence published in bank was compared with the genetic evolution analysis. The results showed that 1 NDV isolates belonged to Class II type II, the amino acid sequence of the F protein cracking site was 112GRQGRL117, and the other 15 were Class I gene 3, the amino acid sequence of F protein cracking site was I12ERQERL117 and Class I was separated. The homology of F protein between 97.8% and more HN proteins was more than 98.2%, and the genetic relationship with the reference strain of Jilin wild bird virus strain J36/13. 48 strains of NDV (34 strains of chicken source virus, 4 duck source virus, 1 pigeon source virus, 9 isolated self environmental samples) and genetic evolution were isolated from the live bird market in the surrounding area of Dongting Lake. Analysis, the results are divided into Class I and Class II two categories, of which 41 strains of Class I, accounting for 3.66% of the sample separation rate, accounting for 85.42% of the total separation rate, are all gene 3, and 7 strains of Class II, accounting for 0.62% of the sample separation rate, accounting for 14.58% of the total separation rate, including gene type I 1, 5 gene type II and 1 gene type, according to the research report, The weak strain of Class I was originally from waterfowl. The chicken source in the Class I strain of this study accounted for 75.6% (31/41), the duck source was 2.4% (1/41), and the homology of the wild bird virus strain J36/13 was more than 97.4%. It showed that the weak strains of Class I existed in waterfowl, the possibility of mutual transmission between poultry and wild birds. Comprehensive full text monitoring The results showed that the virulent Class I strains of Newcastle disease in the Dongting Lake area were highly toxic in the fowl, exceeding the virulent rate of the vaccine strain and the strong virulent strain; there were many virulent strains of the environment source, and there was a certain virus contamination spread. The main epidemic strain was Class I gene 3, which was closely related to the relic relationship of the wild bird virus strain, and the analysis may come from the same poison. Therefore, the pathogen monitoring and molecular epidemiology of Newcastle disease in Dongting Lake area should be highly regarded.
【學位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S855.3

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本文編號：2145881