發(fā)布時(shí)間：2018-07-16 13:27

【摘要】：為探究軸突導(dǎo)向生長(zhǎng)因子Netrin-1在病毒感染中的功能,以豬偽狂犬病病毒感染MEF細(xì)胞為模型,通過熒光定量PCR檢測(cè)Netrin-1基因mRNA在感染前后表達(dá)水平的變化,結(jié)果表明,偽狂犬病病毒刺激可以使得細(xì)胞下調(diào)Netrin-1 mRNA的表達(dá)水平。以小鼠Netrin-1基因保守序列設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物,成功將Netrin-1克隆入pcDNA3.1載體,在MEF細(xì)胞中瞬時(shí)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒,并用偽狂犬病病毒感染細(xì)胞,針對(duì)炎癥因子IL-6、干擾素IFN-β與干擾素刺激基因IFIT1和ISG15的mRNA進(jìn)行qPCR驗(yàn)證,結(jié)果表明,Netrin-1對(duì)于干擾素與干擾素刺激基因的表達(dá)具有抑制作用。免疫印跡試驗(yàn)結(jié)果證明,過表達(dá)Netrin-1使得細(xì)胞核因子P65亞基表達(dá)下調(diào)。表明Netrin-1對(duì)免疫反應(yīng)具有抑制作用,細(xì)胞在受到病毒感染時(shí)下調(diào)Netrin-1的表達(dá)以促進(jìn)免疫反應(yīng)。
[Abstract]:In order to investigate the function of axon oriented growth factor (Netrin-1) in viral infection, the expression of Netrin-1 mRNA in MEF cells infected with porcine pseudorabies virus (PRV) was detected by fluorescence quantitative PCR. Pseudorabies virus stimulation can down-regulate the expression of Netrin-1 mRNA. A pair of specific primers were designed based on the conserved sequence of mouse Netrin-1 gene. Netrin-1 was cloned into pcDNA3.1 vector. The recombinant plasmid was transiently transfected into MEF cells and infected with pseudorabies virus. The expression of IFIT1 and ISG15 mRNA in IFIT-1 and ISG15 was confirmed by qPCR. The results showed that Netrin-1 could inhibit the expression of IFIT-1 and ISG15. The results of Western blotting showed that the expression of nuclear factor p65 subunit was down-regulated by overexpression of Netrin-1. The results indicated that Netrin-1 inhibited the immune response, and the cells down-regulated the expression of Netrin-1 in order to promote the immune response.
【作者單位】： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院動(dòng)物生物技術(shù)中心;
【基金】：國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(201410626018) 四川省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2014NZ0043)
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：2126533