【摘要】：本研究通過從陜北白絨山羊瘤胃液、皺胃液,酸菜,青貯玉米,酵素,微生態(tài)制劑,酵頭,酸奶,乳酸雙歧三聯(lián)片等18個(gè)來源分離鑒定出芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌,采用16S rDNA、18S rDNA保守基因序列分析技術(shù)進(jìn)行菌種鑒定,并對(duì)其培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化。研究了分離出的優(yōu)良菌株不同添加比例在玉米皮-統(tǒng)糠發(fā)酵中的應(yīng)用效果。試驗(yàn)1飼用菌種(株)分離鑒定從陜北白絨山羊瘤胃液、皺胃液,酸菜,青貯玉米,酵素,微生態(tài)制劑,酵母粉、酵頭、酸奶、藥品等18個(gè)來源經(jīng)過形態(tài)學(xué)鑒定以及16S rDNA、18S rDNA保守基因序列分析分離鑒定出芽孢桿菌11個(gè)種,98株;乳酸菌4個(gè)屬,11個(gè)種,75株;酵母菌2個(gè)種,38株。試驗(yàn)2 LB、MRS、察氏培養(yǎng)基的組分優(yōu)化采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)化了LB培養(yǎng)基中可溶性淀粉、胰蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉添加量,芽孢桿菌的生長情況較好的配方為:10g蛋白胨、10g酵母提取物、10g氯化鈉溶于1L蒸餾水。優(yōu)化了MRS培養(yǎng)基中葡萄糖、胰蛋白胨、酵母提取物、牛肉膏添加量,乳酸菌生長情況最為旺盛的配方為:10g蛋白胨、15g酵母提取物、20g葡萄糖、5g牛肉膏、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三銨、2g KH2PO4、0.25g MnSO4、0.58g MgSO4、lml吐溫80溶于1L蒸餾水。優(yōu)化了察氏培養(yǎng)基中蔗糖、蛋白胨、硝酸鈉、磷酸氫二鉀添加量,酵母菌的生長情況相對(duì)最為旺盛的配方為:30g蔗糖、2g蛋白胨、1g NaN03、2g K2HPO4、0.5g MgSO4、0.5g KCl、0.01g FeS04溶于1L蒸餾水。試驗(yàn)3芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌優(yōu)勢菌株的篩選測定了芽孢桿菌菌株連續(xù)7天的纖維素酶活,并確定了最高酶活力和對(duì)應(yīng)各菌株的最佳產(chǎn)酶時(shí)間,同時(shí)測定了最佳產(chǎn)酶時(shí)待測菌株在不同溫度反應(yīng)條件下纖維素酶活力,從中篩選出了6株菌株在20℃-40℃下酶活較高;6株菌株在30℃-50℃下酶活較高;7株菌株在40℃-60℃下酶活較高。測定了部分乳酸菌菌株的生長曲線和產(chǎn)酸曲線,確定了乳酸菌快速生長及產(chǎn)酸能力較強(qiáng)時(shí)間,并在此基礎(chǔ)上測定了待測乳酸菌的產(chǎn)酸能力和生長情況,同時(shí)測定了它們?cè)诓煌瑴囟扰囵B(yǎng)條件下的生長情況,從中篩選出了7株菌株產(chǎn)酸能力較強(qiáng),8株菌株在50℃左右生長良好,7株菌株在37℃左右生長迅速,7株菌株在10℃左右生長相對(duì)良好。測定了部分酵母菌菌株的生長曲線,測定了不同初始pH對(duì)酵母菌生長的影響,同時(shí)測定了不同溫度條件下待測酵母菌生長情況,及37℃培養(yǎng)24h的酵母菌纖維素酶活。從中篩選出7株菌株在50℃左右生長良好,7株菌株在30℃左右生長迅速,8株菌株在10℃左右生長相對(duì)良好,6株菌株纖維素酶活相對(duì)較高。試驗(yàn)4飼用復(fù)合菌劑降解玉米-統(tǒng)糠粗纖維的效果研究試驗(yàn)從前期分離鑒定篩選出的芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌中挑選了出適用于玉米皮-統(tǒng)糠堆積發(fā)酵用的芽孢桿菌JLa,KQ2,KLc,KYG8;乳酸菌ZW22,RQ3,RGJ8;酵母菌JYS2,JL5,JQ10,并連同黑曲霉菌共同發(fā)酵原料,菌株的添加量采用正交設(shè)計(jì),生產(chǎn)工藝根據(jù)楊凌某飼料生產(chǎn)廠家工藝。發(fā)酵結(jié)束后測定了9個(gè)組合中粗纖維、粗蛋白、粗灰分、粗脂肪、還原糖、pH,黃曲霉毒素和玉米赤霉素烯酮毒素,利用正交分析對(duì)乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌、黑曲霉菌添加量和發(fā)酵產(chǎn)品中粗纖維、粗蛋白、粗脂肪、還原糖關(guān)系進(jìn)行分析。研究發(fā)現(xiàn)9個(gè)組合中,組合7(乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌、黑曲霉菌的添加量分別為5%、1%、5%、3%)對(duì)玉米皮-統(tǒng)糠粗纖維的降解效果最好,降解率達(dá)45.20%,且正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分析表明乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌、黑曲霉菌的添加量分別為5%、1%、5%、5%時(shí),效果可能更好。在室溫條件下,供試9種組合的飼用復(fù)合菌劑發(fā)酵玉米皮-統(tǒng)糠7天后,其pH為5.17-5.85,活菌數(shù)達(dá)1011,黃曲霉毒素30ppb和玉米赤霉素烯酮毒素小于500ppb,符合飼料衛(wèi)生生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)。
[Abstract]:The strains were isolated and identified from 18 sources , such as gastric juice , wrinkled gastric juice , pickled vegetable , silage maize , ferment , micro - ecological preparation , yeast powder , silage maize , ferment , micro - ecological preparation , yeast powder , fermented head , yogurt and medicine . The growth curve of 7 strains of lactic acid bacteria was determined at 30 鈩，

本文編號(hào)：2125283