【摘要】：褪黑素(melatonin)是一種伴隨晝夜節(jié)律變化而產(chǎn)生的神經(jīng)內(nèi)分泌胺類激素,主要由哺乳動物松果體和視網(wǎng)膜分泌產(chǎn)生。研究表明,褪黑素主要通過其膜受體(Melatoninreceptor,MR)發(fā)揮生物學(xué)作用,1998年IUPHAR會議將哺乳動物的褪黑素受體命名為MT1、MT2和MT3三種亞型。褪黑素在下丘腦和垂體水平調(diào)節(jié)動物生殖活動深受研究者的關(guān)注,近年來的研究發(fā)現(xiàn),卵巢也是褪黑素直接作用的靶器官,褪黑素膜受體在卵巢各種組織廣泛分布,對卵泡的發(fā)育、雌激素和孕酮的分泌都具有調(diào)節(jié)作用,但是這些研究多集中在人和鼠,對家畜的研究較少,尤其是褪黑素對家畜妊娠期黃體功能調(diào)節(jié)作用的研究未見報道。本研究擬選擇妊娠期母豬為研究對象,采用免疫組織化學(xué)染色、細胞間接免疫熒光、QRT-PCR以及westernblotting等方法研究褪黑素膜受體在妊娠期豬黃體組織和體外培養(yǎng)豬黃體細胞中的分布定位、褪黑素對豬黃體細胞孕酮分泌的調(diào)節(jié)作用及機制。研究結(jié)果如下。1.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明,MT1和MT2廣泛分布于妊娠期豬黃體組織,主要定位于黃體細胞。2.細胞間接免疫熒光結(jié)果表明,MT1和MT2在體外培養(yǎng)的豬黃體細胞中大量分布。細胞活性試驗結(jié)果表明,生理濃度的褪黑素能顯著上調(diào)黃體細胞活性(p0.05)。3.不同濃度梯度褪黑素處理黃體細胞24h,結(jié)果表明,1pg/mL、5pg/mL、25pg/mL、125pg/mL和625pg/mL的褪黑素都能顯著促進孕酮的分泌(p0.05),且呈劑量依賴性。分別以25pg/mL和125pg/mL褪黑素處理黃體細胞0h、8h、16h、24h、32h、40h和48h后,結(jié)果表明,孕酮的分泌量與處理時間呈依賴性,且培養(yǎng)8h后的所有時間點孕酮的分泌量都顯著高于對照組(p0.05)。分別以25pg/mL和125pg/m褪黑素處理黃體細胞16h,同時以褪黑素膜受體抑制劑處理黃體細胞,結(jié)果發(fā)現(xiàn),褪黑素對黃體細胞孕酮分泌的促進作用完全被阻斷。4.分別以25pg/mL和125pg/mL褪黑素處理黃體細胞16h,QRT-PCR和westernblotting方法檢測褪黑素對孕酮合成過程中3種調(diào)節(jié)酶表達的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),褪黑素上調(diào)StAR和P450scc的表達,而對3β-HSD的表達沒有影響;膜受體抑制劑能阻斷褪黑素對StAR和P450scc表達的上調(diào)作用。本研究證實了褪黑素膜受體MT1和MT2廣泛分布于妊娠期豬黃體組織,主要定位于黃體細胞,生理濃度的褪黑素能顯著上調(diào)黃體細胞活性。研究發(fā)現(xiàn)了褪黑素通過其膜受體MT1和MT2促進了黃體細胞孕酮的分泌,且呈時間和劑量依賴性。進一步研究發(fā)現(xiàn),褪黑素通過MT1和MT2促進黃體細胞孕酮分泌的作用可能是上調(diào)了StAR和P450scc來完成的。
[Abstract]:Melatonin (melatonin) (melatonin (melatonin) is a neuroendocrine amine hormone produced by circadian rhythm changes. It is mainly produced by the secretion of mammalian pineal gland and retina. The results show that melatonin mainly plays a biological role through its membrane receptor (Mr). In 1998, the IUPHAR named the mammalian melatonin receptor as three subtypes of MT1, MT2 and MT3. The regulation of animal reproductive activity by melatonin at the level of hypothalamus and pituitary has attracted much attention. In recent years, it has been found that the ovary is also a target organ directly affected by melatonin, and melatonin membrane receptors are widely distributed in various ovarian tissues. Both estrogen and progesterone secretion can regulate follicular development, but these studies mainly focus on human and mouse, but there are few studies on domestic animals, especially the regulation of melatonin on the luteal function of livestock during pregnancy has not been reported. The aim of this study was to study the distribution of melatonin membrane receptor (melatonin membrane receptor) in porcine luteal tissue and porcine luteal cells cultured in vitro by immunohistochemical staining, indirect immunofluorescence RT-PCR and westernblotting. Effects and mechanisms of melatonin on progesterone secretion in porcine luteal cells. The results are as follows. Immunohistochemical staining showed that MT1 and MT2 were widely distributed in porcine luteal tissue during pregnancy, mainly located in luteal cells. The results of cell indirect immunofluorescence showed that MT1 and MT2 were widely distributed in porcine luteal cells cultured in vitro. The results of cell activity test showed that melatonin significantly upregulated luteal cell activity (p0.05). Different concentrations of melatonin treated luteal cells for 24 h. The results showed that melatonin (125pg / mL) and melatonin (625pg / mL) significantly increased progesterone secretion (p0.05) in a dose-dependent manner. After treatment with melatonin at 25 PG / mL and 125 PG / mL for 40 h and 48 h, respectively, the secretion of progesterone in luteal cells was significantly higher than that in control group at all time points (p0.05). Luteal cells were treated with 25 PG / mL and 125pg/m for 16 h, respectively, and luteal cells were treated with melatonin membrane receptor inhibitor for 16 h. The results showed that the effect of melatonin on progesterone secretion in luteal cells was completely blocked. The effects of melatonin on the expression of three regulatory enzymes during progesterone synthesis were detected by 16h QRT-PCR and westernblotting in luteal cells treated with 25 PG / mL and 125 PG / mL melatonin, respectively. The results showed that melatonin up-regulated the expression of star and P450scc, but had no effect on the expression of 3 尾 -HSD, and the membrane receptor inhibitor blocked the up-regulation of the expression of star and P450scc by melatonin. This study confirmed that melatonin membrane receptors MT1 and MT2 were widely distributed in porcine luteal tissues during pregnancy, mainly located in luteal cells. Melatonin at physiological concentration could significantly up-regulate luteal cell activity. It was found that melatonin promoted progesterone secretion in luteal cells in a time-and dose-dependent manner through its membrane receptors MT1 and MT2. Further studies showed that melatonin promoted progesterone secretion in luteal cells by MT1 and MT2, which might be due to the up-regulation of star and P450scc.
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S828

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蔣能群;奇妙的保健因子——褪黑素[J];乳業(yè)科學(xué)與技術(shù);2001年02期

2 黃群山;王建辰;;褪黑素及其在羊季節(jié)性繁殖中的作用[J];國外獸醫(yī)學(xué).畜禽疾病;1991年01期

3 占今舜;張彬;;淺談褪黑素在動物生產(chǎn)中的應(yīng)用[J];飼料博覽;2011年07期

4 張娜;張海軍;楊榮超;黃韞宇;郭仰東;;褪黑素在植物中的功能研究進展[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2012年09期

5 左佳琦;謝佳恒;薛宇軒;馮歡;徐佳妮;黃萱;;褪黑素對緩解植物逆境脅迫作用的研究進展[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2014年03期

6 劉淑英,齡南;褪黑素生理作用的研究進展[J];動物醫(yī)學(xué)進展;2005年07期

7 趙國先;李娜;宋海彬;馬可為;;褪黑素對動物的免疫調(diào)節(jié)作用[J];中國飼料;2008年15期

8 代國杰;朱建津;高琳琳;單立娟;;褪黑素對小鼠抗氧化作用的影響[J];食品工業(yè)科技;2010年03期

9 張娜;張海軍;楊榮超;黃韞宇;郭仰東;;褪黑素及其在植物中的功能研究進展(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2012年09期

10 徐芳;周海鵬;郭早霞;于宏安;袁玉川;鞏智剛;王玉華;;植物褪黑素及其抗逆性研究[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2013年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 石瓊;孫儒泳;張崇理;許榮昆;;人體中褪黑素的生理作用[A];中國動物科學(xué)研究——中國動物學(xué)會第十四屆會員代表大會及中國動物學(xué)會65周年年會論文集[C];1999年

2 賈嬌;楊紅;;褪黑素及褪黑素能類藥物臨床應(yīng)用的研究進展[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國精神醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

3 葉曉華;懷佳萍;孫學(xué)成;徐曉;吳建勝;;褪黑素通過調(diào)節(jié)白介素22改善重癥急性胰腺炎相關(guān)性肺損傷[A];2013第六屆浙江省消化病學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2013年

4 袁崇剛;施英唐;何令;;持續(xù)光照和褪黑素對小鼠骨髓細胞周期的影響[A];動物學(xué)專輯——上海市動物學(xué)會2000年年會論文集[C];2000年

5 劉志民;劉志民;趙瑛;陸祖謙;沈玉美;談雯;彭樹勛;;褪黑素受體在體內(nèi)分布及信息傳導(dǎo)通路的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國內(nèi)分泌學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2001年

6 徐峰;王芳;李經(jīng)才;;褪黑素睡眠調(diào)節(jié)作用的神經(jīng)機制[A];中國生理學(xué)會肥胖的臨床與基礎(chǔ)暨神經(jīng)免疫內(nèi)分泌學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2003年

7 何穎;李經(jīng)才;;褪黑素對學(xué)習(xí)、記憶的作用研究進展[A];2004全國時間生物醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

8 邱旭升;邱勇;陳暉;孫旭;鄧亮生;鄭振耀;;青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸患者褪黑素信號傳導(dǎo)通路的初步研究[A];第八屆全國脊柱脊髓損傷學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

9 吳建勝;懷佳萍;邵穎穎;孫學(xué)成;金尹;黃智銘;;褪黑素通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)改善急性壞死性胰腺炎[A];2012年浙江省內(nèi)科學(xué)年會論文集[C];2012年

10 王衛(wèi)民;肖國民;裘五四;吳建躍;程軍;姜啟周;徐海松;張眉;方蓉;;顱腦損傷昏迷患者血清褪黑素變化的臨床研究初步報告[A];2009年浙江省神經(jīng)外科學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 方舟子 留美學(xué)者，，生物化學(xué)博士;褪黑素究竟有多神奇？[N];經(jīng)濟觀察報;2007年

2 蘋果;未成年人不宜服褪黑素治失眠[N];中國婦女報;2012年

3 李玉霞;“褪黑素”保健品不要隨便吃[N];中國人口報;2004年

4 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所教授　張均田;含褪黑素保健品的功效[N];光明日報;2002年

5 ;褪黑素安全否看看專家怎么說[N];健康報;2002年

6 美國北達科他大學(xué)醫(yī)學(xué)院 任駿 張曉;褪黑素：現(xiàn)狀與前景[N];健康報;2002年

7 任駿 張曉;不必濫用褪黑素[N];科技日報;2002年

8 本報記者 黃萱;“褪黑素”到底是什么[N];人民政協(xié)報;2002年

9 本文由香港麥迪信醫(yī)學(xué)出版有限公司供稿;褪黑素長期服用安全嗎？用于兒童可靠嗎？[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

10 主任醫(yī)師 呂斌;褪黑素使用過量會影響生育[N];衛(wèi)生與生活報;2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 蔣婷婷;褪黑素對糖尿病視網(wǎng)膜病變的保護作用及機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

2 郭攀;褪黑素保護鎘暴露所致肝毒性效應(yīng)的機制探討[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 李吉國;褪黑素對牙髓炎TLR4、NF-κB調(diào)節(jié)機制的相關(guān)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 徐永鵬;褪黑素對1-溴丙烷引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷保護作用及機制研究[D];山東大學(xué);2016年

5 唐立;褪黑素在實驗性主動脈瘤模型中的應(yīng)用及其機制研究[D];南京大學(xué);2015年

6 王日雄;基于胃癌血管生成的褪黑素核受體作用靶點研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

7 龐云渭;褪黑素抑制牛卵母細胞及體外受精胚胎氧化損傷的作用機制[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2016年

8 李孟奇;番茄中油菜素內(nèi)酯緩解氧化鋅納米顆粒脅迫及褪黑素在硒誘導(dǎo)鎘脅迫抗性中的作用機理研究[D];浙江大學(xué);2016年

9 須文;褪黑素在調(diào)控番茄耐熱性中的作用及機制[D];浙江大學(xué);2016年

10 蒲勇;褪黑素對豬腔前卵泡體外發(fā)育的影響及機制研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王江波;褪黑素、鈣調(diào)蛋白在特發(fā)性脊柱側(cè)凸模型中的相互作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 馬賽君;線粒體凋亡途徑參與褪黑素誘導(dǎo)胃癌細胞凋亡[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 趙景新;血液透析患者褪黑素水平與氧化應(yīng)激、炎癥狀態(tài)及睡眠質(zhì)量相關(guān)性分析[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 劉帥;褪黑素對缺氧缺血所致的新生大鼠未成熟腦白質(zhì)損傷的干預(yù)作用[D];鄭州大學(xué);2015年

5 胡奇珍;褪黑素抑制酒精性脂肪肝的動物實驗研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

6 毛琳;不同尺寸納米三氧化鎢致小鼠肝腎毒性研究以及褪黑素的保護作用[D];華中師范大學(xué);2015年

7 張笑哲;褪黑素對氧化應(yīng)激條件下ARPE-19細胞與人臍靜脈內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)體系的作用研究及機制探討[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

8 肖志勇;新型褪黑素受體激動劑Neu-240改善帕金森模型大小鼠運動功能損傷[D];南華大學(xué);2015年

9 胡春利;褪黑素通過Reelin信號通路對Aβ_(1-42)介導(dǎo)的神經(jīng)退行性變的保護作用[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2015年

10 孫業(yè)清;褪黑素對牛精液品質(zhì)、卵母細胞體外成熟及體外發(fā)育能力影響的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

本文編號：2121339