【摘要】：為建立豬肺炎支原體抗原的快速檢測方法,本研究以抗豬肺炎支原體P46蛋白單克隆抗體為包被抗體,抗P46蛋白多克隆抗體為檢測抗體,建立了豬肺炎支原體雙抗體夾心ELISA方法。通過優(yōu)化后的反應(yīng)條件為:抗豬肺炎支原體P46蛋白單克隆抗體包被濃度為2.5μg/mL,抗P46蛋白多抗及酶標(biāo)二抗稀釋度分別為1∶40 000和1∶10 000。該ELISA的重復(fù)性變異系數(shù)小于10%,最低檢出量為9.754 ng/mL,與豬鼻支原體、豬滑液支原體、絮狀支原體等無交叉反應(yīng)。使用該ELISA方法對人工稀釋的培養(yǎng)物中抗原含量進(jìn)行檢測,通過單點(diǎn)法和對樣品倍比稀釋后進(jìn)行雙平行線擬合兩種方法計算,得出兩種計算方法結(jié)果均與真實(shí)值基本相符,但雙平行線法檢測比單點(diǎn)法檢測更加穩(wěn)定。本研究建立的雙抗體夾心ELISA方法為豬肺炎支原體的定量檢測提供了有效手段,可用于豬支原體肺炎滅活疫苗生產(chǎn)過程中抗原的檢測,為滅活疫苗生產(chǎn)中的質(zhì)量控制提供了便利。
[Abstract]:In order to establish a rapid method for the detection of mycoplasma pneumoniae antigen, a sandwich Elisa was developed using monoclonal antibody against P46 protein and polyclonal antibody against P46 protein as coating antibody and polyclonal antibody against P46 protein as detection antibody. The optimized reaction conditions were as follows: the concentration of monoclonal antibody against P46 protein of Mycoplasma suis was 2.5 渭 g / mL, the dilution of anti-P46 multi-antibody and enzyme-labeled second antibody were 1:40 and 1:10 000, respectively. The repeatability coefficient of variation of Elisa was less than 10, and the lowest detectable amount was 9.754 ng / mL. There was no cross reaction with mycoplasma suis, mycoplasma synovium and mycoplasma flocculus. The Elisa method was used to detect the antigen content in the artificially diluted culture. The two methods were calculated by single point method and double parallel line fitting after dilution of the double ratio of the sample. The results of the two methods were in good agreement with the real value. But the double parallel line method is more stable than the single point method. The double antibody sandwich Elisa method established in this study provides an effective method for quantitative detection of mycoplasma pneumoniae, can be used for the detection of antigen in the production of inactivated vaccine of mycoplasma pneumoniae, and is convenient for the quality control in the production of inactivated vaccine.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗室國家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心;江蘇省肉類生產(chǎn)與加工質(zhì)量安全控制協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(31370208) 江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項目(CX(14)2040)
【分類號】：S852.62

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本文編號：2120356