【摘要】：為建立豬肺炎支原體抗原的快速檢測(cè)方法,本研究以抗豬肺炎支原體P46蛋白單克隆抗體為包被抗體,抗P46蛋白多克隆抗體為檢測(cè)抗體,建立了豬肺炎支原體雙抗體夾心ELISA方法。通過(guò)優(yōu)化后的反應(yīng)條件為:抗豬肺炎支原體P46蛋白單克隆抗體包被濃度為2.5μg/mL,抗P46蛋白多抗及酶標(biāo)二抗稀釋度分別為1∶40 000和1∶10 000。該ELISA的重復(fù)性變異系數(shù)小于10%,最低檢出量為9.754 ng/mL,與豬鼻支原體、豬滑液支原體、絮狀支原體等無(wú)交叉反應(yīng)。使用該ELISA方法對(duì)人工稀釋的培養(yǎng)物中抗原含量進(jìn)行檢測(cè),通過(guò)單點(diǎn)法和對(duì)樣品倍比稀釋后進(jìn)行雙平行線擬合兩種方法計(jì)算,得出兩種計(jì)算方法結(jié)果均與真實(shí)值基本相符,但雙平行線法檢測(cè)比單點(diǎn)法檢測(cè)更加穩(wěn)定。本研究建立的雙抗體夾心ELISA方法為豬肺炎支原體的定量檢測(cè)提供了有效手段,可用于豬支原體肺炎滅活疫苗生產(chǎn)過(guò)程中抗原的檢測(cè),為滅活疫苗生產(chǎn)中的質(zhì)量控制提供了便利。
[Abstract]:In order to establish a rapid method for the detection of mycoplasma pneumoniae antigen, a sandwich Elisa was developed using monoclonal antibody against P46 protein and polyclonal antibody against P46 protein as coating antibody and polyclonal antibody against P46 protein as detection antibody. The optimized reaction conditions were as follows: the concentration of monoclonal antibody against P46 protein of Mycoplasma suis was 2.5 渭 g / mL, the dilution of anti-P46 multi-antibody and enzyme-labeled second antibody were 1:40 and 1:10 000, respectively. The repeatability coefficient of variation of Elisa was less than 10, and the lowest detectable amount was 9.754 ng / mL. There was no cross reaction with mycoplasma suis, mycoplasma synovium and mycoplasma flocculus. The Elisa method was used to detect the antigen content in the artificially diluted culture. The two methods were calculated by single point method and double parallel line fitting after dilution of the double ratio of the sample. The results of the two methods were in good agreement with the real value. But the double parallel line method is more stable than the single point method. The double antibody sandwich Elisa method established in this study provides an effective method for quantitative detection of mycoplasma pneumoniae, can be used for the detection of antigen in the production of inactivated vaccine of mycoplasma pneumoniae, and is convenient for the quality control in the production of inactivated vaccine.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心;江蘇省肉類(lèi)生產(chǎn)與加工質(zhì)量安全控制協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31370208) 江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金項(xiàng)目(CX(14)2040)
【分類(lèi)號(hào)】：S852.62

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 向軍儉;吳彤;楊紅宇;林劍;;重組堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA檢測(cè)方法的建立[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);1993年01期

2 戚錫亮，，熊鐘瑾，孔如靜;ELISA檢測(cè)小白鼠曼氏迭宮絳蟲(chóng)裂頭蚴抗體特異性[J];暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);1995年04期

3 傅義娟;用ELISA檢測(cè)豬偽狂犬病血清抗體[J];青海畜牧獸醫(yī)雜志;2001年02期

4 王雪鵬,劉悅竹,姜世金,常維山;用間接ELISA檢測(cè)雞痘病毒抗體的建立與應(yīng)用[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2005年06期

5 趙松波;孫曉林;張少華;周邦信;竇永喜;駱學(xué)農(nóng);;產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌溶血素O基因在大腸桿菌中的優(yōu)化表達(dá)及ELISA檢測(cè)方法的建立[J];中國(guó)獸醫(yī)科學(xué);2009年11期

6 張富強(qiáng),李志華,張念祖;競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)豬瘟病毒抗原[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2005年11期

7 余麗嬋;孫桂桃;陳文;吳先導(dǎo);許文漢;嚴(yán)鳳玲;;應(yīng)用ELISA檢測(cè)獼猴乙型肝炎表面抗原[J];中國(guó)畜禽傳染病;1989年Z1期

8 宋娟;廖秋菊;;重慶煙草地區(qū)ELISA檢測(cè)[J];生物技術(shù)世界;2014年01期

9 劉建杰,何啟蓋,陳煥春,吳斌,徐曉娟,劉軍發(fā),唐先春,貝為成;豬胸膜肺炎放線桿菌毒素I基因的克隆、表達(dá)及其ELISA檢測(cè)方法的建立[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2004年01期

10 王曉明,邵偉娟,王建飛;猴B病毒抗體及B病毒相關(guān)抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果比較[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);1997年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前9條

1 袁紅;;溶血干擾乙型肝炎病毒標(biāo)志物ELISA檢測(cè)的量化評(píng)價(jià)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

2 范薇;于長(zhǎng)明;楊敬;隋麗華;戰(zhàn)大偉;賀爭(zhēng)鳴;孫巖松;;重組鉤端螺旋體外膜蛋白ELISA檢測(cè)方法的建立[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

3 劉陳晨;孫淼;余冠華;青玲;;侵染重慶煙草的番茄斑萎病毒的ELISA檢測(cè)[A];“創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)與現(xiàn)代植保”——中國(guó)植物保護(hù)學(xué)會(huì)第十一次全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨2013年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2013年

4 蔣文曉;盛雅潔;王戰(zhàn)輝;沈建忠;;玉米中伏馬菌素B_1殘留的ELISA檢測(cè)方法研究[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)獸醫(yī)毒理學(xué)與飼料毒理學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)暨獸醫(yī)毒理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第4次全國(guó)代表大會(huì)會(huì)議論文集[C];2012年

5 李健;宋軍科;戰(zhàn)美娜;林青;于三科;;應(yīng)用ELISA檢測(cè)紫外線減毒柔嫩艾美耳球蟲(chóng)YL株蟲(chóng)苗抗體[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)食品衛(wèi)生學(xué)分會(huì)第十一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

6 李多孚;李欣;;ELISA檢測(cè)血清CEA的測(cè)量不確定度評(píng)定的探討[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

7 王凱;虞偉;高德玉;白彩琴;嚴(yán)孝嶺;李曉軍;;特異性ACPA免疫復(fù)合物ELISA檢測(cè)法的建立及其應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

8 劉辰庚;王培昌;;血清抗碳酸酐酶Ⅲ抗體ELISA檢測(cè)方法的建立與初步應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

9 劉世中;佟世德;潘華;馬玉海;蔣忠軍;宋陽(yáng);王珊珊;蘇建新;;人血清犬埃立克體抗體ELISA檢測(cè)方法的建立[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 栗紹文;豬流產(chǎn)嗜性衣原體抗體ELISA檢測(cè)與基因免疫研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

2 毛婭卿;禽白血病病毒抗原/抗體ELISA檢測(cè)方法的建立及準(zhǔn)種分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 曹丙蕾;山羊IL-18定量抗原捕獲ELISA檢測(cè)方法的建立及其免疫增強(qiáng)作用的研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 暴艷敏;ST細(xì)胞蛋白定量ELISA檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[D];西北民族大學(xué);2015年

2 楊萌;牛腺病毒ELISA檢測(cè)方法的建立及在咸陽(yáng)地牛腺病毒血清流行病學(xué)調(diào)查中的應(yīng)用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

3 秦保亮;抗重金屬Hg~(2+)單抗制備及ELISA檢測(cè)方法的建立[D];河南科技學(xué)院;2016年

4 孫勇;抗重金屬銅離子mAb的制備及ELISA檢測(cè)方法的建立[D];河南科技學(xué)院;2016年

5 王釗;洪湖碘泡蟲(chóng)ELISA檢測(cè)方法的建立與初步應(yīng)用[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 陳倩;抗雞傳染性法氏囊病病毒抗體ELISA檢測(cè)方法的建立及標(biāo)準(zhǔn)抗原、標(biāo)準(zhǔn)血清的研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年

7 劉金萍;強(qiáng)力霉素單克隆抗體的制備及ELISA檢測(cè)方法的建立[D];揚(yáng)州大學(xué);2016年

8 劉宏;流行性造血器官壞死病毒ELISA檢測(cè)方法的初步建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

9 華芳;豬胸膜肺炎放線桿菌單克隆抗體的制備及ELISA檢測(cè)方法的建立[D];吉林大學(xué);2007年

10 熊富強(qiáng);兔支氣管敗血波氏桿菌單克隆抗體的制備及雙夾心ELISA檢測(cè)方法的建立[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2120356