本文選題：A型口蹄疫病毒 + D蛋白　； 參考：《解剖學(xué)報(bào)》2017年06期

【摘要】：目的本實(shí)驗(yàn)旨在表達(dá)出高可溶性的A型口蹄疫病毒1D蛋白,并通過電子顯微鏡檢測(cè),以期望形成納米樣顆粒。方法根據(jù)A型口蹄疫病毒核酸序列,得到FMDV A/GDMM/CHA/2013株的1D蛋白基因,并進(jìn)行截短和優(yōu)化,共132個(gè)氨基酸;同時(shí),從結(jié)腸彎曲桿菌(Campylobacter coli)中分離得到135個(gè)氨基酸的鐵蛋白(Fn)基因片段,將A型口蹄疫病毒1D蛋白與鐵蛋白串聯(lián),設(shè)計(jì)并合成了口蹄疫病毒1D蛋白-鐵蛋白片段,命名為CcFnt166AS。構(gòu)建了CcFnt166AS融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9種不同可溶性標(biāo)簽的表達(dá)重組載體。分別轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21(DE3)中,異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo),SDSPAGE電泳對(duì)融合蛋白的可溶性表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),篩選出高可溶性表達(dá)的CcFnt166AS融合蛋白。重組蛋白通過NiNTA Agarose親和純化,進(jìn)行電子顯微鏡檢測(cè)。結(jié)果成功構(gòu)建9種CcFnt166AS表達(dá)載體;9個(gè)標(biāo)簽中,MBP與CcFnt166AS蛋白相融合的可溶表達(dá)效果最好,并獲得了高純度的MBP-CcFnt166AS重組蛋白質(zhì);電子顯微鏡結(jié)果顯示,MBP-CcFnt166AS形成了納米樣顆粒。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)建立了穩(wěn)定獲得CcFnt166AS重組蛋白質(zhì)的方法。
[Abstract]:Objective to express a high soluble protein of foot-and-mouth disease virus (FMDV) 1D and to form nanoparticles by electron microscopy. Methods according to the nucleic acid sequence of FMDV type A foot-and-mouth disease virus, the 1D protein gene of FMDV A / GDMMP / che / 2013 strain was obtained and truncated and optimized for a total of 132 amino acids, and 135 amino acid ferritin (FN) gene fragments were isolated from Campylobacter coli. The 1D protein-ferritin fragment of foot-and-mouth disease virus (FMDV) was designed and synthesized by linking 1D protein with ferritin, named CcFnt166AS. CcFnt166AS fusion recombinant vector containing nine different soluble tags, such as Grifing GST-MBP, Sumo Thioredoxin, 緯 -crystallin Ars PpiBU CeHSP17, was constructed. After transformed into Escherichia coli BL21 (DE3), isopropyl thiogalactoside (IPTG) induced SDSPAGE electrophoresis was used to detect the soluble expression of the fusion protein, and a highly soluble CcFnt166AS fusion protein was selected. The recombinant protein was purified by NiNTA Agarose affinity and detected by electron microscopy. Results 9 CcFnt166AS expression vectors were successfully constructed, and the fusion of MBP with CcFnt166AS protein was the best, and the recombinant protein of MBP-CcFnt166AS with high purity was obtained, and the results of electron microscopy showed that MBP-CcFnt166AS formed nanoparticles. Conclusion A stable method for obtaining CcFnt166AS recombinant protein was established.
【作者單位】： 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部動(dòng)物生化與營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：農(nóng)業(yè)部948重點(diǎn)計(jì)劃(2011-G35) 國(guó)家轉(zhuǎn)基因重大專項(xiàng)(2014ZX0801015B) 河南省高等學(xué)校重點(diǎn)科研項(xiàng)目(17A230013)
【分類號(hào)】：S852.65

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6 ;全球O型口蹄疫病毒流行逐年遞減[J];北方牧業(yè);2012年15期

7 ;口蹄疫新病毒系正威脅近東和歐洲[J];國(guó)外畜牧科技;1999年03期

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9 盧曾軍,劉在新;口蹄疫病毒研究概況[J];中國(guó)獸醫(yī)科技;2003年02期

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6 王冬梅;口蹄疫病毒VP1及多抗原表位基因在植物表達(dá)的研究[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

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8 陳維灶;RNAi抑制口蹄疫病毒復(fù)制與感染的相關(guān)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

9 姜世民;D-氨甲酰水解酶可溶性表達(dá)的遺傳改造和結(jié)構(gòu)與功能研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2007年

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