本文選題：鴨 + 禽流感　； 參考：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：AIV分為多種血清亞型,目前已鑒定出有17種HA亞型和10種NA亞型。幾乎所有亞型的AIV都可以感染禽類,能感染人的AIV主要為H1、H3、H5、H6、H7、H9和H10亞型,其中以H5亞型最為常見(jiàn)。由于宿主范圍的限制,AIV很少感染人類。然而,近年來(lái)禽流感H5N1亞型造成人類感染的病例卻不斷增加。雖然到目前為止,持續(xù)的AIV感染人類的病例尚未見(jiàn)報(bào)道,但在環(huán)境和機(jī)體免疫的選擇壓力下,禽流感H5亞型的適應(yīng)性突變和不斷的抗原漂移現(xiàn)象,可能導(dǎo)致其跨越物種屏障,實(shí)現(xiàn)在人群中傳播。因此,加強(qiáng)對(duì)新發(fā)H5亞型AIV致病性和傳播力的研究,對(duì)防控AIV的大規(guī)模傳播具有至關(guān)重要的作用。本研究采集病死鴨病料,常規(guī)處理后接種于10日齡SPF雞胚,收取24-96h內(nèi)死亡雞胚尿囊液,進(jìn)行血凝和血凝抑制實(shí)驗(yàn)、核酸鑒定及HA和NA基因序列分析。結(jié)果表明,該分離株為H5N5亞型,命名為A/Duck/Changchun/01/2010。HA和NA基因進(jìn)化分析顯示,該毒株屬于新型H5N5流感病毒2.3.2.1系,主要在東亞地區(qū)流行。該研究結(jié)果為進(jìn)一步研究鴨源H5N5禽流感病毒的分子進(jìn)化提供了重要信息。為進(jìn)一步研究該分離毒株的進(jìn)化特點(diǎn),設(shè)計(jì)并合成擴(kuò)增核蛋白(NP)基因、聚合酶蛋白(PB2、PB1、PA)基因的特異性引物,對(duì)核蛋白(NP)、聚合酶蛋白(PB2、PB1、PA)RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,并進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得分離毒株P(guān)B2、PB1、PA、NP基因序列。同時(shí)利用生物信息學(xué)軟件或在線分析軟件分析其信號(hào)肽、跨膜區(qū)和疏水性,并預(yù)測(cè)潛在的糖基化位點(diǎn)和磷酸化位點(diǎn)。對(duì)比分析后發(fā)現(xiàn),該毒株與我國(guó)南方水禽主要流行的AIV同源性較高。禽流感病毒PB2基因的第627位氨基酸和第701位氨基酸對(duì)于AIV跨種間傳播起到重要作用,為了解該病毒聚合酶活性及PB2基因的第627位氨基酸和第701位氨基酸突變后引起聚合酶活性變化情況。利用點(diǎn)突變技術(shù),針對(duì)實(shí)驗(yàn)中測(cè)定的聚合酶基因序列設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn),對(duì)四個(gè)質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切,將酶切后的產(chǎn)物與表達(dá)載體進(jìn)行連接,連接后分別對(duì)PB2基因的1879位和2101位堿基進(jìn)行點(diǎn)突變,使禽流感病毒PB2基因第627位氨基酸由谷氨酸突變?yōu)橘嚢彼?第701位氨基酸由天冬氨酸突變?yōu)樘於０�。將聚合酶蛋白轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中,通過(guò)檢測(cè)熒光活性值報(bào)告病毒聚合酶復(fù)合體的活性。結(jié)果表明,禽流感病毒A/duck/changchun/01/2010的聚合酶蛋白熒光值較低,PB2基因2101位堿基突變對(duì)聚合酶蛋白活性影響不大,PB2基因1879位堿基突變能提高聚合酶蛋白活性,兩個(gè)堿基同時(shí)突變聚合酶蛋白活性明顯提高。
[Abstract]:In order to study the evolution of avian influenza A H5 subtype avian influenza virus ( H5N1 ) , it is important to study the molecular evolution of avian influenza H5 subtype H5 avian influenza virus . In order to understand the activity of the polymerase gene and the change of polymerase activity after the mutation of the 627 - th and 701 - th amino acids of the PB2 gene , the enzyme - cleavage site was designed for the polymerase gene sequence determined in the experiment .
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：2104987