發(fā)布時(shí)間：2018-07-05 20:58

  本文選題：黃體細(xì)胞 + 內(nèi)皮細(xì)胞��； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：本實(shí)驗(yàn)為探究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)與永生化黃體細(xì)胞的體外增殖及孕酮分泌之間的相互關(guān)系,揭示血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(Vascular Endothelial Growth Factor receptor 2,VEGFR-2)在黃體細(xì)胞增殖和其發(fā)揮孕酮的分泌功能中所起到的作用。本實(shí)驗(yàn)采用細(xì)胞培養(yǎng)的方法對(duì)永生化黃體細(xì)胞和永生化內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,并運(yùn)用ELISA方法對(duì)孕酮分泌的變化進(jìn)行檢測(cè),同時(shí)用RT-PCR分析孕酮的三種標(biāo)志酶:STAR1、CYP11A1和3β-HSD的同步變化。本實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果如下:1、外源性VEGF對(duì)共培養(yǎng)細(xì)胞的增殖情況的改善隨濃度的不同而不同,其中,VEGF濃度在10ng/ml和100ng/ml時(shí),在48h時(shí)對(duì)共培養(yǎng)細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用差異顯著(P0.05),而在72h時(shí)該作用呈現(xiàn)極顯著的差異性(P0.001)。2、外源性VEGF對(duì)共培養(yǎng)細(xì)胞分泌孕酮能力的改善隨濃度的不同而不同,該作用在48h和72h時(shí)呈現(xiàn)極顯著的差異性(P0.001),而在24h是該作用不明顯(P0.05)。3、外源性加入SU1498抑制VEGFR-2的活性后,細(xì)胞的增殖效應(yīng)并沒(méi)有顯著變化(P0.05),而在抑制劑中同時(shí)加入10ng/ml VEGF誘導(dǎo)因素后,在72h時(shí)出現(xiàn)對(duì)細(xì)胞增殖抑制的現(xiàn)象(P0.05),而加入100ng/ml VEGF誘導(dǎo)因素時(shí),在48h和72h時(shí)反而出現(xiàn)顯著的促細(xì)胞生長(zhǎng)現(xiàn)象(P0.01)。4、外源性SU1498加入組與SU1498+VEGF混合加入組在抑制孕酮分泌方面產(chǎn)生的效應(yīng)基本一致,在48和72h時(shí)都可對(duì)黃體細(xì)胞分泌孕酮的機(jī)制產(chǎn)生極顯著的抑制效應(yīng)(P0.001),該效應(yīng)與VEGF的濃度并不具有顯著的關(guān)聯(lián)性。VEGF對(duì)黃體細(xì)胞共培養(yǎng)體系的增殖作用呈現(xiàn)出一定的時(shí)間和劑量依賴性,該促進(jìn)作用隨著時(shí)間和劑量的增大而增大,且具有一定的飽和性;受體抑制劑SU1498能夠有效的抑制孕酮的分泌,但其對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用卻具有一定的化學(xué)誘導(dǎo)性,隨著誘導(dǎo)劑VEGF的濃度不同而分別呈現(xiàn)出抑制和促進(jìn)作用。
[Abstract]:To investigate the relationship between vascular endothelial growth factor (VEGF) and proliferation and progesterone secretion of immortalized luteal cells in vitro. To explore the role of vascular endothelial growth factor (VEGF) and vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR-2) in the proliferation of luteal cells and the secretion of progesterone. In this experiment, immortalized luteal cells and immortalized endothelial cells were co-cultured by cell culture method. The proliferation of immortalized luteal cells and the secretion of progesterone were detected by MTT assay and enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa). Meanwhile, the synchronous changes of CYP11A1 and 3 尾 -HSD were analyzed by RT-PCR. The results of this experiment are as follows: 1. The effect of exogenous VEGF on the proliferation of co-cultured cells varies with the concentration of 10ng/ml and 100ng/ml. The effects of exogenous VEGF on the proliferation of co-cultured cells were significantly different at 48h (P0.05), and at 72 h (P0.001) .2.The effects of exogenous VEGF on the secretion of progesterone in co-cultured cells varied with the concentration of VEGF. The effect was significantly different at 48h and 72h (P0.001), but it was not obvious at 24h (P0.05). After the exogenous addition of SU1498 inhibited the activity of VEGFR-2, the proliferative effect of VEGFR-2 was not significantly changed (P0.05), but after the addition of VEGF-induced factors in the inhibitor, At 72 h, the proliferation of cells was inhibited (P0.05), but when 100ng/ml was added, the proliferation of cells was inhibited (P0.05). At 48h and 72h, there was a significant cell growth promoting phenomenon (P0.01). The effects of exogenous SU1498 and SU1498 VEGF on the inhibition of progesterone secretion were basically the same. At 48 h and 72 h, the mechanism of progesterone secretion in luteal cells was significantly inhibited (P0.001), which was not significantly related to the concentration of VEGF. VEGF showed a certain effect on the proliferation of luteal cells in co-culture system. Time and dose dependence, The effect increased with the increase of time and dose, and had a certain saturation. SU1498, a receptor inhibitor, could effectively inhibit the secretion of progesterone, but its inhibitory effect on cell proliferation was chemically induced. The inhibitory and promotive effects of VEGF were observed with the concentration of VEGF.
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S814

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本文編號(hào)：2101764