本文選題：BMSCs + TERT基因�。� 參考：《內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)是存在于骨髓基質(zhì)中的多能干細胞,體外增殖能力強,在特定誘導(dǎo)條件下可跨胚層分化為多種細胞,如中胚層來源的骨骼、軟骨、脂肪細胞.,外胚層來源的神經(jīng)細胞等。因取材方便加之免疫原性弱,成為理想的組織工程種子細胞,在細胞替代治療、基因治療及組織器官再生中具有重要的研究意義及臨床應(yīng)用價值。然而BMSCs體外增殖及多向分化能力隨著不斷傳代會逐步下降,因而使其在研究和應(yīng)用領(lǐng)域的作用受到局限。利用端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(Telomerase reverse transcriptase,THRT)基因修飾BMSCs,可使其成為具有長期持續(xù)增殖能力的“永生化”細胞,“永生化”的BMSCs可作為細胞工程和組織工程等研究領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)細胞,在基礎(chǔ)研究及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中可發(fā)揮更為重要的作用。本論文以綿羊BMSCs為研究對象,構(gòu)建了TERT真核表達載體,轉(zhuǎn)染綿羊BMSCs,經(jīng)篩選得到穩(wěn)定表達TERT基因的BMSCs細胞系,通過生物學(xué)特征分析及多向誘導(dǎo)分化與鑒定,證明經(jīng)TERT基因修飾的BMSCs,可在體外正常高效增殖,并依然保持多向分化能力。主要研究結(jié)果如下：1.體外克隆獲得綿羊TERT基因cDNA序列,采用pcDNA3.1-EGFP載體,經(jīng)基因重組成功構(gòu)建了TERT真核表達載體。2.TERT真核表達載體經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、G418篩選、RT-PCR檢測,篩選得到了穩(wěn)定表達TERT基因的BMSCs細胞系。3.生長曲線表明,經(jīng)7ERT基因修飾的BMSCs,比未經(jīng)基因修飾的BMSCs體外增殖能力更強；TERT-BMSCs細胞表達了干細胞表面因子Oct4、Sox2和Nanog至成脂細胞和成神經(jīng)細胞誘導(dǎo)培養(yǎng),分化細胞不僅出現(xiàn)成脂細胞特有的脂滴、成神經(jīng)細胞特有的形態(tài)和尼氏體,還表達了脂肪細胞特異基因PPAR peroxisome proliferator-activated receptor,過氧化物酶體增殖物激活受體)LEPTIN(肥胖基因)及神經(jīng)元特異基因NSE (neuron-specific enolase,神經(jīng)元特異性烯醇化酶)和GFAP (glial fibrillary acidic protein,膠質(zhì)纖維酸性蛋白),表明TERT-BMSCs細胞仍保持跨胚層的多向分化能力。上述研究為探討B(tài)MSCs細胞永生化機制奠定了必要的基礎(chǔ)。
[Abstract]:Bone marrow - derived mesenchymal stem cells ( MSCs ) , which are derived from bone marrow stromal cells , can be differentiated into many kinds of cells , such as bone , cartilage , fat cells and neural cells .
The expression of the stem cell surface factors Oct4 , Sox2 and Nanog into adipocytes and neural cell - induced culture showed that the differentiated cells were not only the specific lipid droplets of the fat cells , but also the specific forms of the neuron specific genes ( PPAR ) LEPTIN ( obese gene ) and the neuron specific gene NSE ( neuron - specific NSE ) and GFAP ( GFAP ) .
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：Q78;S826

【參考文獻】

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本文編號：2098381