本文選題：綿羊肺炎支原體 + EF-P��； 參考：《西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)》2017年11期

【摘要】：為篩選綿羊肺炎支原體(MO)免疫相關(guān)蛋白,以MO新疆流行株基因組DNA為模板,通過PCR擴(kuò)增其EF-P基因,測(cè)序后對(duì)其編碼蛋白進(jìn)行分子特征分析;用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)其抗原表位集中區(qū)編碼片段;進(jìn)一步將該基因片段克隆入pET-32a(+)中,構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-32a(+)-EF-P,將pET-32a(+)-EF-P質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞Escherichia coli BL21(DE3)中,IPTG誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)后,檢測(cè)重組蛋白反應(yīng)原性和免疫原性。SDS-PAGE結(jié)果顯示,EF-P重組蛋白分子質(zhì)量為29.5ku;Western blot結(jié)果顯示,該重組蛋白可被MO陽性血清特異性識(shí)別,證實(shí)其具有良好的反應(yīng)原性;小鼠免疫試驗(yàn)結(jié)果顯示,該重組蛋白可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體,采用正向間接血凝方法檢測(cè)效價(jià)可達(dá)1∶64,提示其具有較強(qiáng)的免疫原性。
[Abstract]:In order to screen mycoplasma pneumoniae (MO) immune-related protein, the EF-P gene was amplified by PCR using genomic DNA of MO Xinjiang epidemic strain as template, and its encoding protein was analyzed by molecular characterization after sequencing. Using bioinformatics software to predict the encoding fragment of epitope concentration region, the gene fragment was further cloned into pET-32a (), and the prokaryotic expression vector pET-32a () -EF-P was constructed. The plasmid pET-32a () -EF-P was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3), and the target protein was induced by IPTG. The reactivity and immunogenicity of the recombinant protein. SDS-PAGE showed that the molecular weight of EF-P recombinant protein was 29.5ku.Western blot showed that the recombinant protein could be specifically recognized by MO-positive serum, which confirmed that the recombinant protein had good reactivity. The results of mouse immunological test showed that the recombinant protein could induce the production of specific antibody, and the titer of positive and indirect hemagglutination could reach 1: 64, which indicated that the recombinant protein had strong immunogenicity.
【作者單位】： 石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所;
【基金】：國家國際科技合作專項(xiàng)(No.2014DFR31310) 兵團(tuán)中青年科技創(chuàng)新領(lǐng)軍人才計(jì)劃(2016BC001)~~
【分類號(hào)】：S852.62

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2091092