本文選題：玉米赤霉烯酮 + 睪丸支持細(xì)胞��； 參考：《揚(yáng)州大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)是由多種鐮刀菌產(chǎn)生的一種具有雌激素效應(yīng)的非類固醇真菌毒素,污染遍布全世界。ZEA對(duì)動(dòng)物的毒性作用范圍廣泛,近年來(lái)人們對(duì)ZEA與雄性動(dòng)物生殖能力下降存在密切關(guān)系的現(xiàn)象引起了關(guān)注,但相關(guān)機(jī)制不明。睪丸支持細(xì)胞在精子發(fā)生過(guò)程中起著不可替代的作用,因此,研究ZEA對(duì)睪丸支持細(xì)胞的毒性影響對(duì)揭示ZEA雄性動(dòng)物生殖毒性的機(jī)理具有重要意義,并可以為ZEA毒性的防控提供理論依據(jù)。本研究以不同濃度的ZEA處理大鼠原代睪丸支持細(xì)胞建立體外毒性試驗(yàn)?zāi)Ｐ?利用透射電鏡、流式細(xì)胞術(shù)和蛋白免疫印跡等技術(shù),研究了 ZEA對(duì)睪丸支持細(xì)胞結(jié)構(gòu)、凋亡率和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)等影響,并探討了 N-乙酰-半胱氨酸(NAC)在ZEA致睪丸支持細(xì)胞損傷中的保護(hù)作用。1.ZEA對(duì)睪丸支持細(xì)胞活力及超微結(jié)構(gòu)的影響。用不同濃度ZEA(0、5、10、20、40μmol/L)處理大鼠原代睪丸支持細(xì)胞24h,CCK-8法檢測(cè)ZEA對(duì)睪丸支持細(xì)胞活力影響,透射電鏡觀察睪丸支持細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷。結(jié)果:與對(duì)照組相比,隨著ZEA濃度的升高,各染毒組睪丸支持細(xì)胞活力均受到顯著或極顯著的抑制(P0.05或P0.01)。透射電鏡觀察顯示,各染毒組細(xì)胞核出現(xiàn)核膜皺縮,染色質(zhì)固縮趨邊化、甚至片段化,線粒體腫脹、嵴斷裂及空泡化加劇。說(shuō)明ZEA對(duì)大鼠原代睪丸支持細(xì)胞有損傷作用,并存在劑量-效應(yīng)關(guān)系。2.ZEA對(duì)睪丸支持細(xì)胞凋亡的影響。用不同濃度ZEA(0、5、10、20μmol/L)處理大鼠原代睪丸支持細(xì)胞24h,AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)凋亡率,蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)凋亡調(diào)控蛋白細(xì)胞色素C(CytC)、AIF的釋放及Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3表達(dá)量。結(jié)果:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示,與對(duì)照組相比,各染毒組細(xì)胞凋亡率呈現(xiàn)顯著或極顯著升高(P0.05或P0.01);Western Blot檢測(cè)顯示,線粒體中CytC呈現(xiàn)出在5μmol/LZEA處理組顯著下降(P0.05)和10、20μmol/LZEA處理組極顯著下降(P0.01);各染毒組線粒體中AIF均極顯著下降(P0.01);胞漿中CytC呈現(xiàn)出在10μmol/LZEA處理組顯著上升(P0.05)和20μmol/L ZEA處理組的極顯著上升(P0.01);10、20μmol/LZEA處理組胞漿中AIF呈極顯著上升(P0.01);cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3表達(dá)量呈現(xiàn)顯著或極顯著的增加(P0.05或P0.01),而Bcl-2/Bax比值顯著或極顯著的降低(P0.05或P0.01)。表明ZEA能誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞凋亡,caspase依賴性和caspase非依賴性的線粒體途徑均參與了這一過(guò)程。3.ZEA對(duì)睪丸支持細(xì)胞氧化損傷的影響。用不同濃度ZEA(0、5、10、20μmol/L)處理大鼠原代睪丸支持細(xì)胞24h,檢測(cè)胞內(nèi)SOD活性及MDA含量,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ROS水平;裝載JC-1探針,利用免疫熒光結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)線粒體膜電位(Aψm)的變化。結(jié)果顯示:與對(duì)照組比,SOD活力呈現(xiàn)出在1Oμmol/LZEA染毒組顯著升高(P0.05)和在2μmol/LZEA染毒組極顯著升高(P0.01);MDA含量在10μmol/L和20μmol/LZEA染毒組均呈現(xiàn)極顯著升高(P0.01);5μmol/LZEA染毒組ROS水平呈顯著升高(P0.05),10、20μmol/LZEA染毒組ROS水平呈現(xiàn)極顯著升高(P0.01);5μmo1/LZEA染毒組△ψm呈顯著下降(P0.05),10、20μmol/LZEA染毒組△ψm極顯著下降(P0.01)。說(shuō)明ZEA誘導(dǎo)線粒體損傷的氧化應(yīng)激機(jī)制與造成睪丸支持細(xì)胞的毒性密切相關(guān)。4.NAC對(duì)ZEA誘導(dǎo)睪丸支持凋亡中的保護(hù)作用。利用100μmol/L NAC與20μmol/L ZEA單獨(dú)或聯(lián)合處理睪丸支持細(xì)胞24h,AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)凋亡率和ROS水平,Western Blot檢測(cè)調(diào)控凋亡蛋白Bcl-2、Bax、claved-caspase-9和claved-caspase-3表達(dá)量,比色法檢測(cè)胞內(nèi)SOD活性和MDA含量,JC-1探針檢測(cè)線粒體膜電位變化。結(jié)果顯示:與20μmol/LZEA單獨(dú)處理組相比,100μmol/LNAC與20μmol/LZEA聯(lián)合處理組睪丸支持細(xì)胞凋亡率、Bax、cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-3表達(dá)量及ROS水平極顯著降低(P0.01);100μmol/L NAC與20μmol/LZEA聯(lián)合處理組胞內(nèi)SOD活力和MDA含量顯著下降(P0.05);100μmol/L NAC與20μmol/L ZEA聯(lián)合處理組的△ψm和Bcl-2表達(dá)量極顯著增高(P0.01)。說(shuō)明NAC可以降低ZEA對(duì)睪丸支持細(xì)胞氧化損傷作用,對(duì)ZEA誘導(dǎo)的睪丸支持細(xì)胞的凋亡發(fā)生起抑制作用。結(jié)論認(rèn)為,ZEA可以造成睪丸支持細(xì)胞細(xì)胞核、線粒體等超微結(jié)構(gòu)的損傷,誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和介導(dǎo)caspase依賴和caspase非依賴線粒體途徑凋亡的發(fā)生。NAC通過(guò)降低氧化毒性損傷,對(duì)ZEA致睪丸支持細(xì)胞凋亡的發(fā)生起保護(hù)作用。
[Abstract]:ZEA was used to study the effects of ZEA on the cell viability and ultrastructure of the testis . The results showed that the apoptosis rate of the testis - supporting cells was significantly increased with different concentrations of ZEA ( 0 , 5 , 10 , 20 渭mol / L ) . NAC induces oxidative stress and mediated caspase - dependent and caspase - independent mitochondrial pathway apoptosis . NAC protects the ZEA - induced testicular support cell apoptosis by reducing oxidative toxicity .
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S859.8

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2089696