發(fā)布時(shí)間：2018-07-01 07:51

  本文選題：豬囊尾蚴 + 凋亡蛋白酶抑制基因　； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2017年08期

【摘要】：【目的】獲得豬囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制劑(API)基因在大腸桿菌中的最佳表達(dá)條件,為API功能研究奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā恳员磉_(dá)載體pEGX-4T-1、pET-30a及豬囊尾蚴API基因的原核表達(dá)載體pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API為材料,對(duì)影響API蛋白表達(dá)的載體(pEGX-4T-1、pET-30a)、溫度(25,30,37℃)、誘導(dǎo)時(shí)間(2,4,6,8h)、IPTG終濃度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素終濃度(100,200,300,400mmol/L)等條件進(jìn)行優(yōu)化,篩選重組蛋白最佳的表達(dá)條件。對(duì)在最佳條件下獲取的目的蛋白進(jìn)行超聲處理,4℃、10 000r/min離心分別收集上清液和沉淀,對(duì)目的蛋白進(jìn)行可溶性分析;SDS-PAGE后,將目的蛋白條帶轉(zhuǎn)印至硝酸纖維素膜上,與抗His標(biāo)簽抗體共孵育,檢測(cè)目的蛋白的反應(yīng)原性�！窘Y(jié)果】當(dāng)選擇pET系列載體(pET-30a)時(shí),API表達(dá)量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表達(dá)量。API融合蛋白最佳表達(dá)條件為:在含200mmol/L卡那霉素的LB培養(yǎng)基上于37℃培養(yǎng)3h后,加入終濃度為0.4mmol/L的IPTG,再于30℃誘導(dǎo)培養(yǎng)6h。SDS-PAGE結(jié)果表明,pET-30a/API融合蛋白分子質(zhì)量約為53ku,與預(yù)期蛋白分子質(zhì)量一致。Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示,重組蛋白pET-30a/API能夠識(shí)別特異性抗體,顯示獲得了大量表達(dá)正確的目的蛋白�！窘Y(jié)論】確定了API基因的最佳表達(dá)條件,獲得了較大表達(dá)量的API融合蛋白。
[Abstract]:[objective] to obtain the optimal expression conditions of the apoptotic protease inhibitor (API) gene of cysticercus cellulosae in Escherichia coli, and to lay a foundation for the study of API function. [methods] the prokaryotic expression vector pEGX-4T-1pET-30a and the prokaryotic expression vector pEGX-4T-1API-FlagpET-30a / API of cysticercus cellulosae were used as materials. The vector (pEGX-4T-1 / pET-30a), the temperature (25 鈩，

本文編號(hào)：2087076