本文選題：豬偽狂犬病 + IFN-γ-ELISpot�。� 參考：《畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年10期

【摘要】：鑒于常用的抗體檢測(cè)方法不能完整反映免疫豬獲得針對(duì)豬偽狂犬病毒的保護(hù)力,有必要建立豬偽狂犬病病毒(PRV)特異性IFN-γ的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)(ELISpot)方法,并評(píng)估偽狂犬病疫苗細(xì)胞免疫的免疫效果。依照ELISpot基本操作流程,摸索PRV作為刺激原的最適濃度、外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)密度和作用時(shí)間以建立并優(yōu)化該方法。將20頭gB抗體檢測(cè)陰性豬,隨機(jī)分為單獨(dú)弱毒疫苗免疫組、單獨(dú)滅活疫苗免疫組、弱毒疫苗-滅活疫苗聯(lián)合組及對(duì)照組,免疫后攻毒。利用所建方法,結(jié)合gB-ELISA、中和試驗(yàn)及攻毒保護(hù)試驗(yàn),評(píng)價(jià)上述三種免疫程序的效果。試驗(yàn)結(jié)果表明:IFN-γ-ELISpot最佳條件為刺激原濃度2μg·孔~(-1)、外周血單核細(xì)胞(PBMC)濃度106·孔~(-1),培養(yǎng)時(shí)間36h。一免弱毒疫苗二免滅活疫苗組二免后2周,試驗(yàn)豬中和抗體效價(jià)可達(dá)1∶14.48,ELISpot斑點(diǎn)數(shù)可達(dá)(151.8±26.61)個(gè)·孔~(-1),且該免疫程序下,試驗(yàn)豬攻毒后體溫、鼻拭子排毒及臨床癥狀均低于其余試驗(yàn)組,攻毒8d后僅表現(xiàn)呼吸道癥狀;單獨(dú)滅活疫苗免疫組二免后2周,試驗(yàn)豬的中和抗體效價(jià)可達(dá)1∶32.36,而ELISpot斑點(diǎn)數(shù)僅為(40.4±9.07)個(gè)·孔~(-1);單獨(dú)弱毒疫苗免疫組二免后2周,試驗(yàn)豬的中和抗體效價(jià)僅為1∶1.36,但ELISpot斑點(diǎn)數(shù)可達(dá)(189.6±27.36)個(gè)·孔~(-1)。綜合分析攻毒試驗(yàn)結(jié)果和ELISpot斑點(diǎn)數(shù)之間的相關(guān)性,本試驗(yàn)所建立的IFN-γ-ELISpot可用于豬偽狂犬病疫苗的細(xì)胞免疫評(píng)估,為免疫程序的評(píng)價(jià)和選擇提供有效手段。
[Abstract]:Since the commonly used antibody detection methods can not completely reflect the protective power of immunized pigs against porcine pseudorabies virus (PRV), it is necessary to establish an enzyme-linked immunospot assay (Elispot) for porcine pseudorabies virus (PRV) specific IFN- 緯. The immune effect of pseudorabies vaccine was evaluated. According to the basic operating procedure of Elispot, the optimal concentration of PRV as stimulator, the density and duration of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) were explored to establish and optimize the method. Twenty GB antibody negative pigs were randomly divided into three groups: single attenuated vaccine immunization group, single inactivated vaccine immunization group, combined attenuated vaccine and inactivated vaccine group and control group. The effects of the above three immune programs were evaluated by using the established method combined with the gB-ELISA-neutralization test and the anti-drug protection test. The results showed that the optimal conditions were the stimulation concentration of 2 渭 g pore ~ (-1), the concentration of peripheral blood monocyte (PBMC) of 106 holes ~ (-1) and the culture time of 36 h. The neutralizing antibody titer of the test pigs reached 1: 14.48% Elispot spots (151.8 鹵26.61) holes ~ (-1) 2 weeks after the second immunization of the first attenuated vaccine and the inactivated vaccine group, and the body temperature of the tested pigs after the attack of the virus was (151.8 鹵26.61) holes. The detoxification and clinical symptoms of nasal swabs were lower than those of the other test groups, and only respiratory symptoms were observed 8 days after exposure, and 2 weeks after immunization with inactivated vaccine alone. The neutralizing antibody titer of test pigs was 1: 32.36, but the number of Elispot spots was (40.4 鹵9.07) holes ~ (-1), and the neutralizing antibody titer of test pigs was only 1: 1.36 two weeks after immunization with attenuated vaccine, but the number of Elispot spots was (189.6 鹵27.36) holes ~ (-1). Based on the comprehensive analysis of the correlation between the results of anti-virus test and the number of Elispot spots, the IFN- 緯 -ELISpot established in this study can be used to evaluate the cellular immunity of porcine pseudorabies vaccine and provide an effective means for the evaluation and selection of immunization program.
【作者單位】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;生豬健康養(yǎng)殖協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：國(guó)家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-35)
【分類號(hào)】：S858.28

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本文編號(hào)：2078724