本文選題：瘋草中毒 + 解毒藥物��； 參考：《甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：“瘋草”(Locoweed)是棘豆屬、黃芪屬和苦馬豆素屬中有毒植物的統(tǒng)稱,動物長期誤食能引起中毒�，F(xiàn)已查明,吲哚里西啶生物堿苦馬豆素是其主要致毒物質(zhì)。另有研究表明苦馬豆素具有抗病毒感染、增強免疫、抗腫瘤、抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移及潛在的抗艾滋病病毒等多種藥用活性。針對上述現(xiàn)狀,目前研究存在以下幾個問題:1.具有良好作用的家畜瘋草中毒解毒藥物仍處于空白。2.瘋草中有效活性成分苦馬豆素抗病毒作用機制不明確。本研究從瘋草中毒機理出發(fā),通過調(diào)節(jié)苦馬豆素與α-甘露糖苷酶的量化關(guān)系,研制出1種瘋草中毒治療藥物—速康解毒口服溶液,并對其分別進行了藥效和臨床治療試驗。為了闡明苦馬豆素對牛病毒性腹瀉病毒的抗病毒作用機制,及其對免疫細胞因子的調(diào)節(jié)作用影響,進行了以下實驗研究,并得出一定的結(jié)論。(1)通過建立莖直黃芪飼喂試驗家兔中毒模型,利用臨床觀察、體重稱量、α-甘露糖苷酶活性測定和組織病理學(xué)觀察等方法研究了速康解毒口服溶液對莖直黃芪中毒的藥效作用,得出以下結(jié)論:攻毒組、攻毒解毒治療組實驗家兔均在18天左右出現(xiàn)中毒癥狀,表明人工中毒實驗家兔模型建立成功。試驗中速康解毒口服溶液能顯著性升高因中毒造成的體重下降和α-甘露糖苷酶活性降低(P0.05),解毒治療組較攻毒組的病理學(xué)變化輕微,且在試驗期內(nèi)未出現(xiàn)家兔死亡,表明速康解毒口服溶液具有較好的解毒作用。(2)對一起突發(fā)疑似瘋草中毒的小尾寒羊共計131只,通過臨床給予速康解毒口服溶液進行解毒治療得出以下結(jié)論:經(jīng)過診斷、詢問,確定此次突發(fā)疑似瘋草中毒為黃花棘豆中毒,速康解毒口服溶液有效率達到77.86%,表明速康解毒口服溶液具有良好的解毒效果,可以應(yīng)用于瘋草中毒的臨床治療。(3)利用細胞培養(yǎng)技術(shù),采用CPE觀察法和MTT比色法相結(jié)合的方法,檢測不同作用方式下,不同濃度苦馬豆素對BVDV增殖的抑制作用和綜合殺滅作用,得出以下結(jié)論:在體外隨苦馬豆素質(zhì)量濃度的增加,其對BVDV的增殖抑制和綜合殺滅作用都具有很好的量效關(guān)系,比較兩種作用方式下的治療指數(shù)2.5和3.2,說明苦馬豆素對BVDV具有良好的綜合殺滅作用,且對抑制BVDV病毒增殖具有一定的作用,表明苦馬豆素可能對侵入細胞的BVDV的復(fù)制增殖產(chǎn)生抑制以及直接殺滅游離BVDV粒子而發(fā)揮作用。(4)通過建立BVDV感染BALB/c小鼠模型,利用不同劑量苦馬豆素對其進行抗病毒治療,得出以下結(jié)論:高、低劑量苦馬豆素藥物組(1/5LD50)給藥24~48h后對小鼠腹瀉癥狀較病毒組有顯著減輕或減慢作用,對各實驗組BALB/c小鼠的肝、腎、心、肺、脾組織的病理切片觀察結(jié)果綜合比較發(fā)現(xiàn),各實驗組受病毒感染侵害嚴(yán)重程度依次分別為:病毒感染組(B2)苦馬豆素低劑量藥物組(1/5LD50)(B4)苦馬豆素高劑量組(1/5LD50)(B3)≥病毒唑藥物組(B5),說明苦馬豆素在體內(nèi)也具有一定的抗病毒作用。(5)采用雙抗夾心ELISA法檢測苦馬豆素對BVDV感染BALB/c小鼠中IFN-α、IFN-β表達水平的影響,得出以下結(jié)論:苦馬豆素對病毒感染引起的小鼠IFN-α、IFN-β表達量下降具有顯著的上調(diào)作用,表明苦馬豆素可能通過促進IFN-α、IFN-β表達水平誘導(dǎo)細胞合成抗病毒蛋白,發(fā)揮間接抗病毒的作用,也可能通過調(diào)控活化BVDV易感細胞,如T細胞、B細胞等,提高MHC分子的表達,促使CD8+T細胞反應(yīng)形成,進而殺傷感染病毒的靶細胞來影響機體的抗病毒免疫應(yīng)答反應(yīng)。(6)采用雙抗夾心ELISA法檢測BVDV感染BALB/c小鼠中共刺激分子CD80和CD86表達水平的影響,得出以下結(jié)論:苦馬豆素對病毒感染引起的小鼠共刺激分子CD80和CD86表達量下降均具有顯著的上調(diào)作用,表明苦馬豆素可能通過上調(diào)共刺激分子CD80和CD86表達水平,刺激T細胞的活化,產(chǎn)生淋巴因子,導(dǎo)致靶細胞發(fā)生溶解、破壞,增強機體的抗病毒免疫應(yīng)答。(7)采用雙抗夾心ELISA法檢測BVDV感染BALB/c小鼠中IL-1、IL-4、IL-15、IL-12、IL-6和IL-10表達水平的影響,得出以下結(jié)論:苦馬豆素對病毒感染引起的小鼠IL-1、IL-4、IL-15、IL-12、IL-6表達量下降均具有顯著的上調(diào)作用,表明苦馬豆素能夠通過上調(diào)小鼠IL-1、IL-4、IL-15、IL-12、IL-6的表達水平,刺激、促進B細胞和T細胞活化增殖,增強機體細胞免疫應(yīng)答,并通過對感染靶細胞殺傷功能來影響機體的抗病毒免疫調(diào)節(jié)作用。另苦馬豆素對病毒感染引起的小鼠IL-10表達量上升具有顯著的下調(diào)作用,表明苦馬豆素可能通過降低IL-10的表達水平,產(chǎn)生對Th2體液免疫應(yīng)答的抑制調(diào)節(jié),影響機體的抗病毒免疫作用。并推測苦馬豆素誘導(dǎo)的機體抗病毒免疫應(yīng)答以細胞免疫應(yīng)答的方式為主。綜上所述,針對瘋草中毒引起的家畜中毒研制的治療藥物速康解毒口服溶液具有良好的解毒效果;從瘋草中提取分離獲得的生物活性成分苦馬豆素在體內(nèi)、體外均對BVDV具有良好的抗病毒作用,其抗病毒作用機制可能是苦馬豆素能進入動物機體細胞內(nèi)抑制BVDV的復(fù)制增殖或直接滅活游離BVDV粒子,并能通過促進、刺激相關(guān)細胞因子表達量的上調(diào)或下調(diào),誘導(dǎo)機體自身免疫應(yīng)答,協(xié)同發(fā)揮抗病毒作用。
[Abstract]:"Locoweed" is a general name for the poisonous plants of the genus Oxytropis, Astragalus and snoomalin, and the animal's long-term food intake can cause poisoning. It has been found that indolithiidine alkaloids are the main toxic substances. Potential anti AIDS virus and other medicinal activities. Aiming at the above situation, there are several problems as follows: 1. the antidetoxification drugs of domestic animal mad grass poisoning are still in the blank of the blank.2. mad grass, the mechanism of the antiviral action of bitter horse bean is not clear. The quantitative relationship between equinoxin and alpha mannase was quantified, and 1 kinds of medications for the treatment of mad grass poisoning - ktak detoxification oral solution were developed, and their efficacy and clinical trials were carried out respectively. In order to clarify the mechanism of the antiviral action of sac on bovine viral diarrhea virus and its effect on the regulation of immune cell factors, The following experimental studies, and draw certain conclusions. (1) through the establishment of a rabbit model of direct Astragalus feeding test, using clinical observation, weight weighing, alpha mannase activity determination and histopathological observation methods, the effect of ktak detoxification oral solution on stem direct yellow Astragalus poisoning was studied. The experimental rabbits in the drug detoxification group all had the poisoning symptoms about 18 days, which showed that the experimental rabbit model of artificial poisoning was established successfully. In the experiment, the body weight loss and the decrease of the activity of alpha mannase (P0.05) were significantly increased in the test, and the pathological changes of the detoxified treatment group were less than that of the attack group. No rabbits died during the period of examination, indicating that the oral solution of jiykang detoxification has good detoxification effect. (2) a total of 131 Small Tail Han sheep, who are suspected of being poisoned by the mad grass poisoning, have been treated by the clinical treatment of ktak detoxification oral solution for detoxification. The rate of Oxytropis poisoning and ktak detoxification oral solution reached 77.86%, indicating that the ktak detoxification oral solution has good detoxification effect and can be used in the clinical treatment of mad grass poisoning. (3) using the cell culture technique, the CPE observation method and the MTT colorimetric method are combined to detect different concentrations of bitter horse beans to BVDV The following conclusions were concluded: with the increase of the mass concentration of bitterin in vitro, it has a good dose effect relationship to the proliferation inhibition and comprehensive killing effect of BVDV, and compared the therapeutic index of 2.5 and 3.2 under the two modes of action, indicating that the kopsine has a good comprehensive killing effect on BVDV. It has a certain effect on inhibiting the proliferation of BVDV virus, which indicates that sac may inhibit the replication and proliferation of BVDV in invasive cells and directly kill free BVDV particles. (4) the following conclusions are obtained by establishing BVDV infected BALB/c mice model and using different doses of bitter horse bean in antiviral treatment. After the dose of 1/5LD50 (24~48h), the symptoms of diarrhea in mice were significantly reduced or slower than that of the virus group. The pathological sections of the liver, kidney, heart, lung and spleen of the BALB/c mice in the experimental groups were compared. The severity of the virus infection in the experimental groups was respectively: the virus infection group (B2), respectively. The low dose medicament group (1/5LD50) (B4) of high dose group (1/5LD50) (B3) or bavirazole (B5) in the high dose group (B3), indicating that the bitter horse bean has some antiviral effect in the body. (5) the effects of the double anti sandwich ELISA on the expression of IFN- A and IFN- beta in BVDV infected BALB/ c mice were detected by the double anti sandwich ELISA method. The following conclusion was drawn: bitter horse The decrease of IFN- alpha and IFN- beta expression in mice caused by virus infection has a significant up-regulation effect. It indicates that Marin may induce the synthesis of antiviral proteins by promoting IFN- alpha and IFN- beta expression level, exerting the effect of indirect antiviral activity. It may also improve the activation of MHC molecules by regulating the activation of BVDV susceptible cells, such as T cells, B cells and so on. The expression promoted the formation of CD8+T cell response and then killed the target cells of the infected virus to influence the immune response of the body. (6) the effect of the expression level of CD80 and CD86 in the BVDV infected BALB/c mice was detected by the double anti sandwich ELISA method. The following conclusion was drawn: the common spiny of the mice caused by the virus infection by the bitter horse bean The decrease of the expression of CD80 and CD86 has a significant up-regulation effect. It indicates that sac may increase the expression level of CD80 and CD86 of CO stimulators, stimulate the activation of T cells, produce lymphatic factors, cause dissolving and destruction of the target cells, and enhance the immune response of the body. (7) BVDV sense is detected by the double anti sandwich ELISA method. The effects of the expression of IL-1, IL-4, IL-15, IL-12, IL-6 and IL-10 in the BALB/c mice were studied. The following conclusions were drawn: the effect of bitter equine on mice IL-1, IL-4, IL-15, IL-12, IL-6 expression decreased significantly. Promote the proliferation of B and T cells, enhance the cellular immune response of the body, and influence the immune regulation of the body by killing the target cells, and the increase of the expression of IL-10 in mice caused by virus infection has a significant downregulation effect. It is shown that sac may reduce the expression of IL-10 by reducing the expression of water. The inhibitory regulation of the immune response to the body's humoral immune response and the antiviral immunity of the body are produced, and it is conjectured that the antiviral response of the body is mainly in the way of cellular immune response. To sum up, the antidote solution of the therapeutic drug, which is developed for the domestic animal poisoning caused by the mad grass poisoning, has good detoxification. Results: the bioactive ingredient, bitter horse bean, extracted from the mad grass in the body, has a good antiviral effect on BVDV in vitro. The mechanism of its antiviral action may be that the bitter horse bean can enter the cell of the animal body to inhibit the replication and proliferation of BVDV or directly inactivate the free BVDV particles, and can stimulate the related cell causes by promoting. Up regulation or down regulation of the expression level can induce the body's autoimmunity and play an antiviral role.
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S856.9

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本文編號：2063889