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豬圓環(huán)病毒1型微滴數(shù)字PCR定量檢測方法的建立

發(fā)布時(shí)間:2018-06-23 22:45

  本文選題:豬圓環(huán)病毒Ⅰ型 + 微滴數(shù)字PCR。 參考:《中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)》2017年11期


【摘要】:以豬圓環(huán)病毒1型ORF1基因?yàn)榘谢?建立了可對(duì)其準(zhǔn)確定量的微滴數(shù)字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)方法。對(duì)ddPCR反應(yīng)中的探針濃度進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果顯示:ddPCR反應(yīng)中的最佳探針濃度為250nmol/L;ddPCR方法線性相關(guān)系數(shù)(R2)為0.999,呈良好的線性關(guān)系;檢測限為7.8copies/20μL;變異系數(shù)為2.7%;與其他病毒無交叉反應(yīng)。通過對(duì)臨床樣品的檢測,檢測結(jié)果與實(shí)時(shí)熒光PCR結(jié)果一致。結(jié)果表明:新建立的ddPCR方法敏感性高、特異性強(qiáng),可用于豬圓環(huán)病毒1型的定量檢測。
[Abstract]:Using ORF1 gene of porcine circovirus type 1 as the target gene, an accurate and quantifiable microdrop (droplet digital PCR PCR method was established. The probe concentration in ddPCR reaction was optimized. The results showed that the optimal probe concentration was 250nmol / LddPCR with a linear correlation coefficient (R2) of 0.999 9, a detection limit of 7.8copies/20 渭 L, a coefficient of variation of 2.7%, and no cross reaction with other viruses. The detection results of clinical samples were consistent with the results of real-time fluorescence PCR. The results showed that the new ddPCR method was highly sensitive and specific, and could be used for quantitative detection of porcine circovirus type 1.
【作者單位】: 中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心OIE豬繁殖與呼吸綜合征參考實(shí)驗(yàn)室;中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【基金】:科技部科技基礎(chǔ)性工作專項(xiàng)(2013FY113300-6)
【分類號(hào)】:S852.651

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本文編號(hào):2058744

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