發(fā)布時間：2018-06-22 02:59

  本文選題：苦馬豆素 + BRL-3A��； 參考：《西北農(nóng)林科技大學》2015年碩士論文

【摘要】：苦馬豆素(Swainsonine,SW)為分布于中國西部草地豆科黃芪屬和棘豆屬等有毒植物的主要毒性成分。家畜采食瘋草后,容易出現(xiàn)典型的瘋草中毒癥狀,全身各組織器官細胞出現(xiàn)廣泛的空泡變性。前期苦馬豆素致BRL-3A細胞毒性損傷的研究表明,苦馬豆素能夠引起肝細胞的存活率降低,肝細胞形態(tài)嚴重損害及毒性損傷標志酶釋放,最終造成肝細胞死亡。但其作用機制還不清楚。為探索苦馬豆素抑制細胞存活率及造成細胞死亡的機制,本論文以大鼠BRL-3A細胞系為研究對象,進行苦馬豆素誘導細胞凋亡機理的研究,取得以下結(jié)果。1.苦馬豆素誘導BRL-3A細胞凋亡的細胞核形態(tài)學檢測:用不同濃度的苦馬豆素(700,900和1100μg/mL)攻毒BRL-3A細胞48h及900μg/mL苦馬豆素攻毒BRL-3A細胞不同時間(24,48和72h)后,Hoechst 33258對細胞核染色,在熒光顯微鏡下觀察細胞核的形態(tài)學變化。結(jié)果顯示,與對照組相比,苦馬豆素可造成細胞核染色質(zhì)固縮、染色加深、細胞核碎裂等典型的凋亡特征,且細胞出現(xiàn)凋亡呈現(xiàn)時間和劑量依賴性。該試驗從形態(tài)學的角度說明苦馬豆素能夠誘導BRL-3A細胞凋亡。2.苦馬豆素誘導BRL-3A細胞凋亡的Annexin V-FITC/PI雙染檢測:用不同濃度的苦馬豆素(700,900和1100μg/mL)攻毒BRL-3A細胞48h及900μg/mL苦馬豆素攻毒BRL-3A細胞不同時間(24,48和72h)后,Annexin V-FITC/PI雙染,采用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率的變化。結(jié)果顯示,與對照組相比,苦馬豆素造成BRL-3A細胞凋亡率差異顯著或極顯著地上升(P㩳0.05或P㩳0.01),并呈時間-劑量依賴性;同時,苦馬豆素能夠減少正常細胞的比重,差異顯著或極顯著(P㩳0.05或P㩳0.01);結(jié)果表明,苦馬豆素能夠顯著誘導正常細胞凋亡,呈時間-劑量依賴性。該試驗從生物化學的角度說明苦馬豆素能夠誘導BRL-3A細胞凋亡。3.苦馬豆素誘導BRL-3A細胞凋亡相關(guān)蛋白表達水平的檢測:用不同濃度的苦馬豆素(700,900和1100μg/mL)攻毒BRL-3A細胞48h及900μg/mL苦馬豆素攻毒BRL-3A細胞不同時間(24,48和72h)后,Western blot檢測細胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達情況。結(jié)果顯示,與對照組相比,細胞中caspase 3,8和9的表達量逐漸上升,procaspase 8的表達量逐漸下降,Fas和FasL的表達量及Bax/Bcl-2的值逐漸上升,表現(xiàn)出差異顯著(P㩳0.05),并呈現(xiàn)時間或劑量依賴性;結(jié)果表明,苦馬豆素能夠誘導BRL-3A細胞凋亡,同時,死亡受體通路和線粒體通路共同參與苦馬豆素誘導BRL-3A的細胞凋亡。
[Abstract]:Swainsonine SW is the main toxic component of the genus Astragalus and Echinoides in the grassland of western China. After feeding on the wild grass, the animals are prone to the typical toxic symptoms of the wild grass and the extensive vacuolar degeneration of the tissues and organs of the whole body. The previous studies on the cytotoxic injury of BrL-3A cells induced by krisbanin showed that the survival rate of hepatocytes was decreased, the morphological damage of hepatocytes and the release of toxic damage marker enzymes were induced, which resulted in the death of hepatocytes. However, the mechanism of its action is not clear. In order to explore the mechanism of the inhibition of cell survival and cell death induced by krisbanin in rat BRL-3A cell line, the mechanism of cell apoptosis induced by krisbanin was studied in this paper, and the following results were obtained. 1. Nuclear morphology of BRL-3A cells induced by krisbanin: Hoechst 33258 was stained at different concentrations (700900 渭 g / mL and 1100 渭 g / mL) for 48 h and 900 渭 g / mL for BRL-3A cells (24448 and 72 h) after treatment with different concentrations of krisbanin (700900 渭 g / mL and 1100 渭 g / mL), and then the cells were exposed to different concentrations of kaliotocin (700900 渭 g / mL and 1100 渭 g / mL) for 48 h and 900 渭 g / mL respectively. The morphological changes of nucleus were observed under fluorescence microscope. The results showed that, compared with the control group, the canonical apoptotic characteristics of the cells were characterized by chromatin condensation, deep staining and nuclear fragmentation, and the apoptosis appeared in a time-and dose-dependent manner. From the morphological point of view, the experiment showed that kariotin could induce apoptosis of BRL-3A cells. 2. Annexin V-FITC / Pi double staining for apoptosis of BRL-3A cells induced by krisbanin: annexin V-FITC / Pi double staining was applied to BRL-3A cells at different concentrations (700900 渭 g / mL and 1100 渭 g / mL) for 48 h and 900 渭 g / mL (24 h, 48 h and 72 h), respectively. Apoptosis rate was detected by flow cytometry. The results showed that compared with the control group, the apoptosis rate of BRL-3A cells increased significantly or extremely significantly (P0. 05 or P0. 01). The difference was significant (P0. 05 or P0. 01). The results showed that the apoptosis of normal cells was induced in a time-dose-dependent manner. From the biochemistry point of view, the experiment showed that kariotin could induce apoptosis of BRL-3A cells. 3. Detection of apoptosis-related protein expression in BRL-3A cells induced by krisbanin: Western blot was used to detect apoptosis in BRL-3A cells at different concentrations (700900 and 1100 渭 g / mL) for 48 h and 900 渭 g / mL respectively. Expression of related proteins. The results showed that, compared with the control group, the expression of caspase 3O 8 and 9 increased gradually, the expression of procaspase 8 decreased gradually, and the expression of Bax / Bcl-2 increased gradually, showing a significant difference (P0. 05), and presented a time or dose dependent manner. The results showed that the apoptosis of BRL-3A cells could be induced by krisbanin, and the death receptor pathway and mitochondrial pathway were involved in the apoptosis of BRL-3A cells.
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S859.82

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本文編號：2051262