發(fā)布時間：2018-06-16 07:01

  本文選題：PID1 + 磁性納米顆粒　； 參考：《山東農業(yè)大學》2015年碩士論文

【摘要】：養(yǎng)豬生產是世界動物產業(yè)的重要組成部分。隨著全球經濟的發(fā)展,豬肉品質已經引起了消費者和生產者的廣泛重視。規(guī)�；B(yǎng)豬生產已經造成肉質變差,肌內脂肪降低。肉質是畜牧生產中最重要的經濟性狀之一。提高豬肉品質,對于養(yǎng)豬業(yè)有著十分重要的意義。肌內脂肪,即大理石紋,是影響肉質的最重要指標之一,影響肉的嫩度、多汁性以及口感。眾多研究結果表明:磷酸絡氨酸互作結構域1(PID1)基因的表達與肌內脂肪沉積有關,PID1基因是脂肪沉積的候選基因。隨著生物技術的發(fā)展,轉基因技術得到快速發(fā)展,它已經是生產用于科研、農業(yè)生產以及疾病控制的基因修飾動物的一個非常有利的工具。精子介導轉基因是基于精子細胞的特有能力來結合、內化外源DNA,然后通過受精作用將其轉入卵內。精子介導轉基因技術與其他方法相比,有著高效率、低成本、簡便操作等主要優(yōu)勢,不需要胚胎操作或是昂貴的實驗設備。磁性納米顆粒作為把藥物或基因轉染指定目標細胞或組織的方法,已經得到廣泛研究。磁性納米轉染是一種簡單、通用、高效的基因轉移方法。本試驗中,PEI包被的磁性納米顆粒被用來作為基因轉移的介質來轉染精子,之后,經過轉染的精子用來介導轉基因。我們獲得了PID1高表達的轉基因豬,并進行了檢測。主要結果如下:1.將實驗室前期構建成功的pIRES2-AcGFP1-PID1真核表達載體與磁性納米顆粒polyMAG-1000室溫共孵育10 min,之后將磁性顆粒-質�；旌衔锱c精液室溫共孵育30min,將轉染后的精液通過人工授精方式對3頭母豬進行授精,生產轉基因豬F0代。2.PCR和Southern blot被用來檢測外源基因。本試驗F0代共獲得仔豬37頭,陽性個體(PCR和Southern blot共陽性)13頭,陽性率35.13%。其中,獲得24頭活仔豬,陽性個體7頭,陽性率29.16%。3.熒光定量PCR和Western blot檢測顯示目的基因PID1在轉基因陽性豬的表達要高于陰性豬。結果發(fā)現(xiàn)在背最長肌組織和肝臟組織中,轉基因陽性豬PID1基因的表達量顯著高于陰性豬(P0.05);在背膘、腎臟組織中兩者表達差異不顯著(P0.05)。PID1蛋白的檢測結果與PID1的mRNA表達量的結果一致:背最長肌組織和肝臟組織中,陽性組與陰性組相比蛋白表達量顯著升高(P0.05)。4.建立利用SYBR Green I實時熒光定量PCR法來檢測轉基因豬外源基因整合拷貝數(shù)的方法。以4頭F0代試驗豬為研究對象(2頭轉基因陽性豬,2頭陰性豬),以轉鐵蛋白受體基因為內參基因,通過SYBR Green I實時熒光定量PCR建立針對外源基因GFP和內參基因的雙標準曲線和方程。對轉基因豬基因組DNA中外源基因和內參基因的拷貝數(shù)同時定量檢測,外源基因與內參基因起始模板拷貝數(shù)的比值即為外源基因在轉基因豬中的整合拷貝數(shù),同時利用Southern blot進行驗證分析。結果顯示,實時熒光定量PCR法檢測2頭轉基因陽性豬外源基因拷貝數(shù)分別為3和2,2頭轉基因陰性豬外源基因拷貝數(shù)均為0,結果同Southern blot檢測一致。本試驗證明實時熒光定量PCR法高通量、靈敏、方便,可以更好的用于轉基因豬外源基因整合拷貝數(shù)的檢測。5.以4頭F0代試驗豬為研究對象(2頭轉基因陽性豬,2頭陰性豬)進行肉質測定,結果顯示:在pH1,pH24、滴水損失、烹飪損失、肉中水分、干物質方面,陽性豬與陰性豬相比較差異均不顯著(P0.05)。在剪切值上,陽性豬比陰性豬要大且差異顯著(P0.05)。肌內脂肪含量陽性組顯著高于陰性組,差異顯著(P0.05),說明PID1基因與肌內脂肪的沉積有關。
[Abstract]:Sperm mediated transgenosis is one of the most important economic characters in animal husbandry . A double standard curve and equation for exogenous gene GFP and internal reference gene were established by SYBR Green I real - time fluorescence quantitative PCR .
【學位授予單位】：山東農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S828

【二級參考文獻】

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1 田小利，陳蘭英;轉基因動物研究中存在問題[J];生物工程進展;1995年05期

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3 邱潔;郭錫熔;李曉南;王玢;倪毓輝;張敏;吳偉玲;陳榮華;;新基因NYGGF4在肥胖患兒脂肪組織中的表達驗證及生物信息學分析[J];實用兒科臨床雜志;2008年07期

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5 史春梅;季晨博;張春梅;朱金改;陳玲;郭錫熔;;NYGGF4基因表達沉默對3T3-L1脂肪細胞線粒體代謝的影響[J];實用兒科臨床雜志;2012年19期

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本文編號：2025818