本文選題：雙峰駝 + ALNA��； 參考：《甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：皺胃淋巴集結(jié)區(qū)(Aggregated lymphoid nodules area,ALNA)是2003年王雯慧教授首次發(fā)現(xiàn)于雙峰駝皺胃的特有器官化黏膜相關(guān)淋巴組織。為明確雙峰駝ALNA免疫與微生物屏障特征及其對(duì)局部黏膜免疫的作用機(jī)制,本研究以阿拉善雙峰駝為研究對(duì)象,將其分為5組,即胚胎組(約10~13月胎齡)、幼年組(1~2歲)、青年組(3~5歲)、壯年組(6~16歲)和老年組(17~20歲),進(jìn)行了以下4個(gè)方面的研究:(1)首先采用免疫組織化學(xué)、圖像分析及統(tǒng)計(jì)等方法,詳細(xì)觀察形成免疫屏障的主要效應(yīng)細(xì)胞IgA~+和IgG~+細(xì)胞在不同年齡雙峰駝ALNA不同區(qū)域的分布特點(diǎn)和規(guī)律。結(jié)果表明,胚胎時(shí)期的ALNA中無IgA~+和IgG~+細(xì)胞分布。而在其他4個(gè)年齡組這兩類細(xì)胞均彌散分布于其固有層內(nèi),并且它們?cè)趫A頂區(qū)的密度分別顯著低于其在非圓頂區(qū)的密度(P0.05)。同時(shí),除胚胎組外的每一年齡組中,IgA~+與IgG~+細(xì)胞密度在圓頂區(qū)差異不顯著(P0.05);IgA~+細(xì)胞密度在老年組的非圓頂區(qū)顯著低于IgG~+細(xì)胞密度(P0.05),而其他年齡組非圓頂區(qū)中的統(tǒng)計(jì)結(jié)果卻與此相反(P0.05)。更重要的是,在老年組,IgA~+細(xì)胞在圓頂區(qū)和非圓頂區(qū)的密度都分別顯著低于幼年組和青年組相應(yīng)部位(P0.05);而IgG~+細(xì)胞在非圓頂區(qū)密度分別顯著低于幼年組和青年組的相應(yīng)部位(P0.05),而在圓頂區(qū)其顯著低于幼年組(P0.05)。研究結(jié)果提示,IgA~+和IgG~+細(xì)胞主要分布于效應(yīng)區(qū),該分布特點(diǎn)與其分泌的抗體形成免疫防御屏障密切相關(guān),且衰老可顯著降低兩類細(xì)胞密度,但不改變兩類細(xì)胞彌散分布的特征。少量分布于誘導(dǎo)區(qū)的IgA~+和IgG~+細(xì)胞與免疫記憶關(guān)系密切,衰老也使其分布密度均顯著下降。(2)采用組織學(xué)、免疫組織化學(xué)、圖像分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)等方法,研究探討了IgG的轉(zhuǎn)運(yùn)受體FcRn在ALNA的表達(dá)規(guī)律及增齡性變化特點(diǎn)。結(jié)果表明,從胚胎組到老年組該區(qū)域的上皮細(xì)胞均表達(dá)FcRn,而且在ALNA發(fā)育成熟后,FcRn在非圓頂區(qū)上皮的表達(dá)顯著高于在圓頂區(qū)上皮的表達(dá)(P0.05);此外,FcRn還表達(dá)于ALNA的血管內(nèi)皮、平滑肌和次級(jí)淋巴濾泡中巨噬細(xì)胞與樹突狀細(xì)胞。在老齡組,FcRn的表達(dá)量迅速下降,但仍高表達(dá)于次級(jí)淋巴濾泡中的巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。研究結(jié)果提示,在雙峰駝ALNA中,FcRn雖然在胚胎到老年的黏膜免疫誘導(dǎo)部位—濾泡相關(guān)上皮有所表達(dá),但主要表達(dá)于黏膜免疫效應(yīng)部位—非黏膜相關(guān)上皮,同時(shí)還表達(dá)于各年齡次級(jí)淋巴濾泡中的巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。(3)本文在前期研究基礎(chǔ)之上,選擇alna最發(fā)達(dá)的青年駝,基于微生物16srdna高通量測(cè)序技術(shù),對(duì)alna黏膜表面的微生物屏障結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析并與其在回腸淋巴集結(jié)(peyer’spatches,pps)之間的差異進(jìn)行比較。分析結(jié)果顯示:雙峰駝alna具有很高的細(xì)菌多樣性,從雙峰駝alna的網(wǎng)格區(qū)、縱行區(qū)及回腸pps區(qū)中共鑒定到18門、30綱、61目、61科、68屬類的細(xì)菌。擬桿菌門、厚壁菌門、疣微菌門和變形菌門為其優(yōu)勢(shì)菌門,且在不同部位之間沒有差異;而纖維桿菌門、迷蹤菌門和螺旋體門在網(wǎng)格區(qū)和縱行區(qū)的豐度顯著高于回腸pps區(qū),梭桿菌門在回腸pps區(qū)的豐度顯著高于網(wǎng)格區(qū)和縱行區(qū)。在科的分類水平上,普雷沃氏菌科、瘤胃菌科、毛螺旋菌科、韋榮球菌科、bs11、食物谷菌科、rf16、擬桿菌科、elusimicrobiaceae、mogibacteriaceae、梭菌科、消化鏈球菌科、梭桿菌科為共同優(yōu)勢(shì)菌科,且不同部位之間沒有顯著差異。而纖維桿菌科、韋榮球菌科、彎曲桿菌科、螺旋體科、r4-45b、r4-41b、dethiosulfovibrionaceae在網(wǎng)格區(qū)和縱行區(qū)的豐度顯著高于回腸pps;腸桿菌科、疣微菌科、理研菌科、barnesiellaceae、odoribacteraceae、產(chǎn)堿菌科、脫鐵桿菌科、消化球菌科和turicibacteraceae在回腸pps的豐度顯著高于網(wǎng)格區(qū)和縱行區(qū)。研究結(jié)果提示,在alna黏膜定植的菌群與回腸pps區(qū)定植的菌群雖然在門水平幾乎無差異,但在科的分類水平上有較大的不同。(4)基于itraq定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),對(duì)青年雙峰駝alna的網(wǎng)格區(qū)、縱行區(qū)和回腸pps區(qū)表達(dá)的總蛋白及差異蛋白進(jìn)行定量分析,并對(duì)其進(jìn)行g(shù)o、cog和kegg注釋和富集。結(jié)果顯示,鑒定到的總蛋白數(shù)為2513,其中網(wǎng)格區(qū)與縱行區(qū)相比,鑒定到60個(gè)差異蛋白,在網(wǎng)格區(qū)其中37個(gè)表達(dá)較高,23個(gè)較低;網(wǎng)格區(qū)與回腸pps相比,鑒定到67個(gè)差異蛋白,其中38個(gè)表達(dá)較高,19個(gè)較低;而縱行區(qū)與回腸pps相比,鑒定到111個(gè)差異蛋白,其中67個(gè)表達(dá)較高,44個(gè)較低。對(duì)總蛋白進(jìn)行kegg路徑分析,這些蛋白被注釋到與免疫相關(guān)的路徑主要包括細(xì)胞的骨架調(diào)控以及免疫細(xì)胞分化、黏附、遷移、fcγr調(diào)節(jié)的吞噬、抗原的加工和處理等31條路徑。對(duì)差異蛋白基于kegg數(shù)據(jù)庫進(jìn)行代謝路徑富集,主要比對(duì)了如下路徑中的關(guān)鍵蛋白:在處理與提呈抗原過程相關(guān)的蛋白,包括mhc-Ⅱ、β2m、cd4、MHC-Ⅰ、CD8、CD74和ICAM-1;T細(xì)胞激活的相關(guān)蛋白,包括鳥苷酸置換因子1(Vav1)、T細(xì)胞淋巴瘤侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)因子1(Tiam1)、肌動(dòng)蛋白多聚化調(diào)節(jié)分子(RhoA)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、絲氨酸蘇氨酸激酶(AKT)和鳥氨酸釋放蛋白(Ras);T細(xì)胞-B細(xì)胞受體路徑中的相關(guān)蛋白,包括CD21、CD22、鳥苷酸置換因子(VAV)、CD40L以及CD45;以及主要的黏附分子α4β7及配體VCAM-1和MAdCAM。研究結(jié)果證明,雙峰駝ALNA的網(wǎng)格區(qū)和縱行區(qū)與回腸PPs在涉及抗原攝取、加工、處理,T細(xì)胞和B細(xì)胞激活以及淋巴細(xì)胞的趨化與歸巢等關(guān)鍵蛋白的整體表達(dá)水平較為接近,但也存在局部差異。本研究證明,雙峰駝ALNA的免疫與微生物屏障特征及其對(duì)局部黏膜免疫的作用呈現(xiàn)以下基本特征:(1)IgA~+和IgG~+細(xì)胞彌散分布于ALNA效應(yīng)區(qū)是其最為顯著的特征之一,該特征對(duì)于IgA及IgG在該區(qū)形成完整的保護(hù)屏障具有重要意義;(2)除SIgA為黏膜免疫主效應(yīng)分子外,IgG也具備參與黏膜免疫穩(wěn)態(tài)維持的條件。同時(shí),衰老可降低IgA~+和IgG~+細(xì)胞的分布密度及FcRn的表達(dá)水平;(3)定植在ALNA黏膜的優(yōu)勢(shì)菌群與其在回腸PPs黏膜中相同,但其組成結(jié)構(gòu)存在一定差異;(4)ALNA的蛋白質(zhì)表達(dá)譜與回腸PPs之間具有很大的相似性,但其參與細(xì)胞骨架調(diào)控及抗原攝取等相關(guān)蛋白的表達(dá)水平存在一定的差異。這為研究衰老對(duì)胃黏膜免疫穩(wěn)態(tài)維持的影響提供依據(jù),也為進(jìn)一步揭示ALNA在消化道黏膜免疫中的地位奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The results showed that IgA ~ + and IgG ~ + cells were significantly lower than those in the young group ( P0.05 ) . The results showed that IgA ~ + and IgG ~ + cells were significantly lower in the dome area than in the young group ( P0.05 ) . ( 2 ) The expression and age - related changes of the transport receptor of IgG were studied by means of histological , immunohistochemical , image analysis and statistics . The results showed that the expression of FRs Rn in the non - dome area was significantly higher than that in the epithelium of the dome area after the development of ALNA . ( 3 ) On the basis of the previous research , we selected alna ' s most developed camel , analyzed the microbial barrier structure of alna mucosa on the basis of 16srdna high - throughput sequencing technology . The results suggested that although there was almost no difference in the levels of bacteria between alna mucosa and ileum pps , there was a great difference in the classification level of the family . ( 4 ) Based on itraq quantitative proteomic technique , a quantitative analysis of the total protein and differential protein expressed in the grid area , longitudinal area and ileum pps region of alna in young Bactrian alna was performed . ( 1 ) IgA ~ + and IgG ~ + cells are the most prominent feature in the formation of intact protective barrier .
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S824

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1 張旺東;雙峰駝ALNA的免疫與微生物屏障特征及其蛋白組學(xué)研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

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本文編號(hào)：2022278