發(fā)布時間：2018-06-15 13:48

  本文選題：豬繁殖與呼吸綜合征病毒 + 豬肺泡巨噬細胞��； 參考：《中國農(nóng)業(yè)大學》2015年博士論文

【摘要】：主要組織相容性復合體Ⅰ類分子(MHCⅠ)能夠遞呈病毒抗原,從而激活細胞毒性T細胞(CTL),活化的CTL可以識別并清除病毒感染的細胞。已有的研究表明,豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)能夠下調(diào)單核/巨噬細胞表面的豬白細胞抗原Ⅰ類分子(SLA Ⅰ)。本論文分析了PRRSV下調(diào)豬肺泡巨噬細胞(PAMs) SLA Ⅰ類分子的機制,以期為理解PRRSV的免疫抑制和免疫逃逸機理提供科學依據(jù)。流式細胞術(shù)分析結(jié)果表明,高、低致病性PRRSV毒株的感染均可下調(diào)PAMs表面SLA Ⅰ類分子水平,且高致病性PRRSV毒株的能力更強。進一步以高致病性PRRSV毒株JXwn06為材料,分析了PRRSV感染細胞表面SLA Ⅰ類分子的內(nèi)化動態(tài)和細胞內(nèi)SLA Ⅰ類分子的外排趨勢。結(jié)果顯示,PRRSV感染可導致胞內(nèi)SLA Ⅰ類分子外排水平減少,但SLA Ⅰ類分子的內(nèi)化過程不受影響。分別用針對SLA Ⅰ-HC和β2m的特異性多克隆抗體進行Western blot分析,結(jié)果顯示,高、低致病性PRRSV毒株感染PAMs的HC和β2m的蛋白水平均明顯下調(diào),且高致病性PRRSV毒株的下調(diào)效應更顯著,而加入蛋白酶體抑制劑后,HC和β2m蛋白的下調(diào)程度隨之減弱。同時,HC和β2m蛋白發(fā)生明顯的泛素化。以上結(jié)果表明,PRRSV感染能夠誘導HC和β2m經(jīng)蛋白酶體途徑降解,從而導致PAMs表面SLA Ⅰ類分子水平的下調(diào)。利用慢病毒系統(tǒng)包裝PRRSV各結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白,并轉(zhuǎn)導PAM傳代細胞系3D4/21,進行流式細胞術(shù)分析。結(jié)果顯示,表達病毒非結(jié)構(gòu)蛋白la (Nsp1α)的慢病毒轉(zhuǎn)導細胞表面的SLA Ⅰ類分子水平明顯下調(diào)。同時,轉(zhuǎn)導PK-15和IPEC-J2細胞的表面SLA Ⅰ類分子水平也下調(diào),并伴隨著HC和β2m蛋白含量的明顯下降。分別構(gòu)建HC和β2m及Nsp1α和2個Nsp1α突變質(zhì)粒,通過突變分別破壞Nsp1αN端鋅指結(jié)構(gòu)域構(gòu)象(M-NZF)及其木瓜樣蛋白酶活性(M-PCPα)。將構(gòu)建的質(zhì)粒分別共轉(zhuǎn)染HEK 293T細胞,結(jié)果顯示,Nsp1α及其突變蛋白均能夠與HC和β2m蛋白發(fā)生互作,且Nsp1α能夠誘導HC和β2m經(jīng)泛素-蛋白酶體途徑降解,但其N端鋅指結(jié)構(gòu)域的構(gòu)象變化可影響Nsp1α的誘導活性。此外,激光共聚焦分析結(jié)果表明,Nsp1α能夠與HC以及β2m主要共定位于細胞質(zhì)中。不同截短后的Nsp1α均不能誘導HC和β2m蛋白的降解。以上結(jié)果表明,Nsp1α N端鋅指結(jié)構(gòu)域的構(gòu)象對于其完整分子誘導的HC和β2m的泛素-蛋白酶體降解十分重要。綜上所述,我們的研究表明,PRRSV可通過誘導PAMs HC和β2m經(jīng)泛素-蛋白酶體途徑降解從而減少SLA Ⅰ類分子的外排,最終導致細胞表面SLA Ⅰ類分子水平的下調(diào)；PRRSV Nsp1α具有誘導HC和β2m經(jīng)泛素-蛋白酶體途徑降解的能力。研究結(jié)果揭示了PRRSV感染影響PAMs遞呈抗原能力的分子機制,為進一步闡釋PRRSV的免疫抑制和免疫逃逸機理提供了有價值的科學依據(jù)。
[Abstract]:The main histocompatibility complex class I (MHC 鈪，

本文編號：2022205