本文選題：A型豬流感病毒 + TaqMan探針�。� 參考：《中國動(dòng)物檢疫》2016年12期

【摘要】：根據(jù)A型豬流感病毒(SIV)的基質(zhì)蛋白(M)編碼基因保守序列設(shè)計(jì)合成一對(duì)特異性引物和一條Taq Man探針,建立了一種檢測(cè)A型SIV的熒光RT-PCR方法。結(jié)果顯示,該方法對(duì)H1N1、H3N2和H9N2亞型SIV均呈特異性擴(kuò)增,對(duì)豬瘟病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬流行性腹瀉病毒和豬傳染性胃腸炎病毒等豬的其他常見病毒無交叉擴(kuò)增反應(yīng);該方法對(duì)M基因RNA對(duì)照(SIV-M-RNA)的最適線性檢測(cè)范圍為3.8×10~1~3.8×10~8拷貝數(shù)/反應(yīng),標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=-3.4365X+40.091,相關(guān)系數(shù)(R~2)為0.999 8,最低檢出限為38個(gè)拷貝數(shù)的SIV-M-RNA。對(duì)3個(gè)不同濃度(3.8×10~3~3.8×10~5 copies/μL)的SIV-M-RNA進(jìn)行組間和組內(nèi)重復(fù)試驗(yàn),每個(gè)濃度的Ct值變異系數(shù)均小于1.5%,具有良好的重現(xiàn)性。用該方法對(duì)860份進(jìn)口豬的鼻拭子樣本和78份國內(nèi)豬場(chǎng)豬鼻拭子樣本進(jìn)行SIV檢測(cè),結(jié)果進(jìn)口豬鼻拭子樣本的SIV檢測(cè)均為陰性,17份國內(nèi)豬場(chǎng)豬鼻拭子樣本SIV檢測(cè)為陽性。本研究提供了一種快速、敏感和特異的A型豬流感病毒檢測(cè)方法。
[Abstract]:A pair of specific primers and a Taq Man probe were designed and synthesized according to the conserved sequence of the matrix protein (MN) encoding gene of Swine Influenza virus type A (SIV), and a fluorescent RT-PCR method for detecting SIV was established. The results showed that the method was specific to H1H3N2 and H9N2 subtype SIV, but not cross-amplified to other common viruses such as swine fever virus, porcine reproductive and respiratory syndrome virus, porcine epidemic diarrhea virus and porcine infectious gastroenteritis virus. The optimal linear detection range for M gene RNA control SIV-M-RNAs is 3.8 脳 10 ~ (-1) ~ 3.8 脳 10 ~ (-8) copy number / response. The standard curve equation is Y-3.4365X 40.091, the correlation coefficient is 0.999 ~ (2), and the lowest detection limit is 38 copies of SIV-M-RNA. Three SIV-M-RNAs with different concentrations of 3. 8 脳 10 ~ (3) 3. 8 脳 10 ~ (5) copies/ 渭 L) were tested by repeated experiments. The coefficients of variation of Ct values of each concentration were less than 1. 5%, which showed that SIV-M-RNA had good reproducibility. This method was used to detect the SIV of 860 imported pig nasal swab samples and 78 domestic pig farm nasal swabs samples. The results showed that the SIV test of imported pig nasal swab samples were all negative and 17 domestic pig farm nasal swabs samples were positive for SIV detection. This study provides a rapid, sensitive and specific detection method for swine influenza A virus.
【作者單位】： 天津出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心;
【基金】：天津市科技支撐項(xiàng)目(13ZCZDNCO1300) 天津市濱海新區(qū)惠民項(xiàng)目(2013-BK15H013)
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：2014297