本文選題：旋毛蟲 + NOD1受體　； 參考：《東北農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：旋毛蟲病是由旋毛蟲感染宿主引起的一種嚴(yán)重的寄生蟲病。這種感染大多數(shù)情況下是食源性的。宿主被旋毛蟲感染的過程中蟲體可產(chǎn)生各類抗原與宿主免疫系統(tǒng)相互作用,從而危害宿主健康。天然免疫系統(tǒng)能在第一時間發(fā)現(xiàn)識別并抵抗病原體的入侵。NOD1受體是一種關(guān)鍵的天然免疫受體,在許多細(xì)胞和組織中均存在。一般NOD1受體被病原體激活后可活化下游的效應(yīng)分子RIP2,它的能夠引起caspase-1、NF-κB、MAPKs等信號路徑被激活,誘導(dǎo)TNF-α、IL-1β和IL-6等炎性因子分泌,進(jìn)而引起多種免疫應(yīng)答反應(yīng)。研究表明,NOD1受體與許多種病原體感染引起的免疫應(yīng)答相關(guān),如細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲等。而在旋毛蟲感染中關(guān)于NOD1受體的研究未見報道。所以,本研究應(yīng)用熒光定量PCR、Western blot、ELISA等實驗方法來著重研究旋毛蟲感染對宿主NOD1受體通路的影響,從而探討旋毛蟲感染與宿主免疫系統(tǒng)之間互相作用的機(jī)制。依據(jù)Gen Bank中登錄的小鼠NOD1、RIP2、NF-κB和GAPDH序列,設(shè)計并合成引物,建立以上基因的熒光定量PCR檢測方法。在旋毛蟲感染小鼠后0.5d、4d、7d、14d、21d、28d、35d應(yīng)用熒光定量PCR檢測其腹腔巨噬細(xì)胞及小腸、心臟、肺臟、肌肉組織中NOD1、RIP2和NF-κB m RNA表達(dá)水平。應(yīng)用Western blot對腹腔巨噬細(xì)胞中NOD1、RIP2、NF-κB p65、NF-κB p-p65進(jìn)行檢測。應(yīng)用ELISA測定小鼠腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清和血清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量。熒光定量PCR結(jié)果表明,旋毛蟲感染小鼠后小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中各目的基因表達(dá)量均呈現(xiàn)雙峰的趨勢,其中NOD1、RIP2和NF-κB m RNA在感染后0.5d和21d、4d和21d、0.5d和21d先后呈現(xiàn)兩個峰值。在小腸和心臟中,感染不同時期各目的基因表達(dá)量都有升高,分別于感染后4d和14d達(dá)到峰值。在肺臟中,NOD1 m RNA表達(dá)量僅在感染后7d略增多,而RIP2的m RNA表達(dá)量在各個感染期均呈現(xiàn)上升趨勢,并于感染后4d到達(dá)峰值。在肌肉中,各目的基因在感染初期變化不明顯,而于感染后21d顯著升高,28d到達(dá)峰值。Western blot結(jié)果表明,在旋毛蟲感染小鼠后小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中NOD1、RIP2和NF-κB p-p65表達(dá)量均有不同程度的升高,其變化趨勢與熒光定量PCR結(jié)果相似。ELISA結(jié)果顯示,感染旋毛蟲小鼠腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清和小鼠血清中TNF-α、IL-6的含量均顯著升高,而IL-1β的含量幾乎沒有變化。另外,本研究在體外用旋毛蟲肌幼蟲ES抗原作用于健康小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,并應(yīng)用熒光定量PCR對細(xì)胞內(nèi)NOD1、RIP2和NF-κB基因表達(dá)水平進(jìn)行監(jiān)測,Western blot對細(xì)胞內(nèi)NOD1、RIP2、NF-κB p65、NF-κB p-p65表達(dá)量進(jìn)行測定,ELISA測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α、IL-1β和IL-6含量的變化。熒光定量PCR結(jié)果表明,在一定的ES抗原作用濃度和時間范圍內(nèi),細(xì)胞中各目的基因的表達(dá)量均隨作用濃度和時間的增加而下降。Western blot結(jié)果表明,ES抗原的刺激可以使細(xì)胞內(nèi)NOD1、RIP2和NF-κB p-p65蛋白表達(dá)量增加。ELISA結(jié)果顯示,ES抗原的作用可以使細(xì)胞TNF-α和IL-6分泌量增多,但I(xiàn)L-1β變化不明顯。以上研究結(jié)果表明,旋毛蟲感染可以引起小鼠NOD1受體的激活,上調(diào)NOD1受體通路中關(guān)鍵分子RIP2和下游分子NF-κB的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞因子TNF-α和IL-6的分泌。旋毛蟲肌幼蟲ES抗原可以激活并調(diào)節(jié)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞中NOD1受體通路。此外,旋毛蟲感染還可引起宿主NOD1受體免疫耐受。但是由于旋毛蟲與宿主免疫系統(tǒng)之間互相作用機(jī)制的復(fù)雜性,兩者之間如何作還需更加深入的研究。
[Abstract]:The expression levels of NOD1 , RIP2 , NF - 魏B and NF - 魏B in peritoneal macrophages of mice were detected by fluorescence quantitative PCR , Western blot and ELISA . The results showed that the expression of NOD1 , RIP2 and NF - 魏B in the peritoneal macrophages of mice after infection could increase the expression of NOD1 , RIP2 and NF - 魏B in peritoneal macrophages of mice .
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S855.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 王澤;胡靜;許靜秀;李曉云;劉暢;趙祥;王琦;宋銘忻;;酸性條件對旋毛蟲肌幼蟲TsGAD mRNA表達(dá)水平的影響[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2016年04期

2 李曉云;徐佳;李巍;禹洋;劉暢;俞昭e，

本文編號：1993873