本文選題：口蹄疫病毒 + 結(jié)構(gòu)蛋白��； 參考：《微生物學(xué)報(bào)》2017年05期

【摘要】：【目的】利用口蹄疫病毒的反向遺傳操作技術(shù),構(gòu)建含不同外源標(biāo)簽口蹄疫病毒的全長克隆,鑒定口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1容忍不同外源標(biāo)簽的能力�！痉椒ā客ㄟ^融合PCR技術(shù),在FMDV O/HN/93全長感染性克隆的VP1 G-H環(huán)分別引入V5、TC12、KT3、3FLAG外源標(biāo)簽,構(gòu)建全長質(zhì)粒。全長質(zhì)粒經(jīng)Not I線化后轉(zhuǎn)染表達(dá)T7 RNA聚合酶的穩(wěn)定細(xì)胞,拯救重組病毒。RT-PCR、序列測定、間接免疫熒光鑒定病毒,噬斑和一步生長曲線分析重組病毒的生物學(xué)特性�！窘Y(jié)果】成功拯救到表達(dá)V5或KT3表位標(biāo)簽的重組病毒,未能拯救到表達(dá)TC12或3×FLAG的重組病毒。V5和KT3表位標(biāo)簽的插入均影響了口蹄疫病毒的復(fù)制能力�！窘Y(jié)論】重組口蹄疫病毒的成功拯救為未來標(biāo)記疫苗以及口蹄疫病毒作為表達(dá)載體等的研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:[Objective] to construct a full-length clone of foot-and-mouth disease virus containing foot-and-mouth disease virus (FMDV), and identify the ability of FMD VP1 to tolerate different external labels. [Methods] V5, TC12, KT3,3FL were introduced into the VP1 G-H ring of FMDV O/HN/93 full-length infected clone by the fusion of PCR technology. AG extraneous label, construct full length plasmid. The whole plasmids were transfected with T7 RNA polymerase after Not I linearization. The recombinant virus.RT-PCR, sequencing, indirect immunofluorescence identification virus, plaque and one step growth curve were used to analyze the biological characteristics of recombinant virus. [results] the weight of V5 or KT3 epitopes was successfully saved. The failure to save the expression of TC12 or 3 * FLAG recombinant virus.V5 and KT3 epitopes all affect the replication ability of foot-and-mouth disease virus. [Conclusion] the successful rescue of FMD has laid the foundation for the future study of labeled vaccine and foot-and-mouth disease virus as an expression vector.
【作者單位】： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：甘肅省農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究與應(yīng)用開發(fā)項(xiàng)目(GNSW-2014-22) 甘肅省青年科技基金計(jì)劃(1606RJYA256)~~
【分類號】：S852.65

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本文編號：1988788