本文選題：微球 + 獸藥��； 參考：《中國計(jì)量學(xué)院》2015年碩士論文

【摘要】：懸浮芯片技術(shù)是最近幾十年興起的多元分析方法,廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)和核酸檢測。微球是懸浮芯片技術(shù)的重要載體。本文嘗試先利用分散聚合方法合成單分散聚苯乙烯微球,再用沉降分離法分離獲得目標(biāo)微球,最后用后修飾法在微球表面修飾羧基,成功制得粒徑約為5435nm,帶羧基的單分散聚苯乙烯微球。這為以后研制懸浮芯片系統(tǒng)配套使用的熒光微球奠定扎實(shí)的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)證明二抗上標(biāo)記的PE熒光信號(hào)能被懸浮芯片系統(tǒng)所識(shí)別,并成功地將獸藥抗原偶聯(lián)到微球上。之后優(yōu)化了反應(yīng)條件,偶聯(lián)時(shí)七種獸藥抗原的最佳加入量為:甲硝唑4μg,呋喃唑酮8μg,萊克多巴胺4μg,沙丁胺醇2μg,克倫特羅4μg,磺胺二甲嘧啶4μg,磺胺喹惡啉8μg;反應(yīng)時(shí),獸藥抗體的最佳加入量為:萊克多巴胺5ng,沙丁胺醇10ng,克倫特羅20ng,磺胺喹惡啉10ng,磺胺二甲嘧啶20ng,甲硝唑200ng,呋喃唑酮100ng;羊抗兔PE標(biāo)記二抗、羊抗鼠PE標(biāo)記二抗的最佳稀釋倍數(shù)分別為300、150;而最適的一抗孵育、二抗孵育時(shí)間分別為60min、45min�；趦�(yōu)化后的實(shí)驗(yàn)參數(shù),根據(jù)間接競爭法,獸藥抗原偶聯(lián)微球作為探針與靶分子共同競爭獸藥抗體,再以PE標(biāo)記二抗作為報(bào)告信號(hào),建立了萊克多巴胺、克倫特羅、沙丁胺醇、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹惡啉、呋喃唑酮代謝物、甲硝唑七種獸藥的懸浮芯片技術(shù)單一檢測方法。該單一獸藥檢測方法靈敏度高,線性范圍寬,特異性強(qiáng),回收率均在73.2%~108.3%之間。其中,萊克多巴胺、克倫特羅、沙丁胺醇、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹惡啉、呋喃唑酮代謝物、甲硝唑的檢出限分別達(dá)到0.81、0.094、0.83、0.112、0.066、0.28、0.95ng/m L。基于單一獸藥殘留懸浮芯片技術(shù)檢測方法和特異性識(shí)別實(shí)驗(yàn),建立了該七種獸藥同時(shí)測定的多殘留懸浮芯片技術(shù)分析方法。該多殘留分析方法對(duì)萊克多巴胺、克倫特羅、沙丁胺醇、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹惡啉、呋喃唑酮代謝物、甲硝唑的檢測范圍分別為1.00~200、0.20~100、1.00~100、0.20~100、0.10~100、1.00~50、1.00~100ng/m L,檢出限分別為0.93、0.16、0.85、0.16、0.094、0.80、0.89ng/m L。七種獸藥的結(jié)構(gòu)類似物對(duì)檢測無明顯干擾反應(yīng)。除了AOZ,其余獸藥的回收率均在70%~120%之間。這證明本多殘留分析方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、線性范圍寬、回收率良好等優(yōu)點(diǎn)。與酶聯(lián)免疫吸附分析法相比較,懸浮芯片技術(shù)不僅具有多元分析的特性,而且在檢測范圍、最低檢測限等許多方面也優(yōu)于ELISA。綜上,懸浮芯片技術(shù)是一種優(yōu)秀的獸藥多殘留分析的快速檢測方法,為食品中污染物多殘留快速分析提供全新的方法。
[Abstract]:Suspension chip technology is a multivariate analysis method developed in recent decades, which is widely used in protein and nucleic acid detection. Microspheres are important carriers of suspension chip technology. In this paper, we try to synthesize monodisperse polystyrene microspheres by dispersion polymerization, then separate them by sedimentation separation method to obtain target microspheres. Finally, we modify carboxyl groups on the surface of microspheres by post-modification method. Monodisperse polystyrene microspheres with carboxyl groups were successfully prepared with a diameter of about 5435 nm. This will lay a solid foundation for the future development of fluorescent microspheres used in the suspension chip system. The results show that the PE fluorescence signal labeled by the second antibody can be recognized by the suspension chip system and the veterinary drug antigen is successfully coupled to the microspheres. After that, the optimum reaction conditions were optimized. The optimal dosages of seven veterinary antigens were as follows: metronidazole 4 渭 g, furazolidone 8 渭 g, ractopamine 4 渭 g, salbutamol 2 渭 g, clenbuterol 4 渭 g, sulfamdimethazine 4 渭 g, sulfamethoxaline 8 渭 g. The optimum dosage of veterinary drug antibody was ractopamine 5 ng, salbutamol 10 ng, clenbuterol 20 ng, sulfamethoxaline 10 ng, sulfadiazine 20 ng, metronidazole 200 ng, furazolidone 100 ng, sheep anti PE second antibody, The optimum dilution times of sheep anti-mouse PE labeled second antibody were 300150, and the optimal incubation time of the first antibody was 60 min and 45 min respectively. Based on the optimized experimental parameters, according to indirect competition law, veterinary antigen-coupled microspheres were used as probes to compete with target molecules for veterinary drug antibodies, and PE labeled second antibody was used as report signal to establish ractopamine, clenbuterol and salbutamol. Single determination of sulfadiazine, sulfamethoxaline, furazolidone metabolites and metronidazole by suspension chip technique. The method has the advantages of high sensitivity, wide linear range and strong specificity, and the recovery rate is between 73.2% and 108.3%. The detection limits of ractopamine, clenbuterol, salbutamol, sulfadimethazine, sulfamethoxaline, furazolidone metabolite and metronidazole were 0.81ng / m, 0.81ng/ mL, 0.83ng/ mL, 0.830.09ng/ m, respectively, and the detection limits of metronidazole were 0.81ng/ m. Based on the detection method of single veterinary drug residue suspension chip and the specific identification experiment, a multi-residue suspension chip analysis method for the simultaneous determination of seven veterinary drugs was established. The detection limits of ractopamine, clenbuterol, salbutamol, sulfadimidine, sulfamethoxaline, furazolidone metabolite and metronidazole were 1.000.200.20ng / ml, 0.101.001.001.00501.00100ng / mL, respectively, and the detection limit was 0.93U 0.160.160.850.160.094U 0.800.89ngmL / L, respectively. The structural analogues of seven veterinary drugs had no obvious interference reaction to the detection. With the exception of AOZ, the recoveries of all veterinary drugs ranged from 70% to 120%. This method has the advantages of high sensitivity, high specificity, wide linear range and good recovery. Compared with enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa), suspension chip technology not only has the characteristics of multivariate analysis, but also is superior to ELISAs in many aspects, such as detection range, minimum detection limit and so on. In summary, suspension chip technology is an excellent rapid detection method for multiresidue analysis of veterinary drugs, which provides a new method for rapid analysis of contaminants in food.
【學(xué)位授予單位】：中國計(jì)量學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S859.84

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本文編號(hào)：1982927