發(fā)布時(shí)間：2018-06-05 05:06

  本文選題：白細(xì)胞介素-10 + 豬圓環(huán)病毒2型��； 參考：《西北農(nóng)林科技大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：白細(xì)胞介素-10(interleukin-10,IL-10)是機(jī)體重要的抑炎因子,它的抗炎調(diào)控機(jī)制是以調(diào)控體內(nèi)的炎癥平衡為核心目標(biāo),但卻可以被多種病原微生物運(yùn)用以逃避機(jī)體的免疫識(shí)別與清除。豬圓環(huán)病毒2型(procine circovirus type 2,PCV2)是引起以斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征為主要特征的豬圓環(huán)病毒病的主要病原,發(fā)病豬的典型病變特點(diǎn)是機(jī)體免疫功能低下和淋巴細(xì)胞缺失等。PCV2感染豬的外周血和組織中高表達(dá)IL-10,作為機(jī)體重要的調(diào)控因子,IL-10在PCV2感染引發(fā)豬圓環(huán)病毒病的過程中可能發(fā)揮著重要的調(diào)控作用,但在PCV2的感染與致病過程中IL-10究竟發(fā)揮何種調(diào)控作用,IL-10對淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞)的變化產(chǎn)生什么影響,目前還不清楚。本試驗(yàn)以野生型C57BL/6小鼠和il10-/-型C57BL/6小鼠為模式動(dòng)物,首先通過接種PCV2建立PCV2感染小鼠模型,Real-time PCR檢測PCV2在小鼠體內(nèi)的復(fù)制情況,western blotting檢測小鼠體內(nèi)Cap蛋白的表達(dá)情況,組織切片鑒定PCV2感染小鼠模型的組織病變;然后復(fù)制il10-/-型C57BL/6小鼠的PCV2感染模型,運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠體內(nèi)的淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞)的亞群分布和絕對數(shù)目,通過與Mock組小鼠對比,確定il10基因缺失對PCV2感染、復(fù)制和致病過程的調(diào)控作用。研究取得如下結(jié)果。1.通過給小鼠接種PCV2成功建立了PCV2感染的野生型C57BL/6小鼠模型。小鼠滴鼻接種PCV2后,在小鼠的外周血、下頜淋巴結(jié)、肺臟和肝臟檢測到PCV2 ORF2;Real-time PCR檢測感染小鼠肺臟中的病毒載量顯示,在PCV2感染后2周和4周時(shí)病毒DNA水平顯著高于感染1周時(shí)病毒DNA水平,但感染4周時(shí)病毒DNA水平下降到2周時(shí)的一半。同時(shí),在小鼠肺臟、肝臟和下頜淋巴結(jié)中western blotting均檢測到Cap蛋白。鏡下觀察小鼠的組織切片可見,PCV2感染小鼠1、2和4周后肺臟組織肺泡間隔增寬,肺泡間隔有不同程度的淋巴細(xì)胞浸潤,表現(xiàn)為間質(zhì)性肺炎特征。觀察小鼠淋巴結(jié)病理變化,PCV2感染后1周時(shí),小鼠淋巴結(jié)中淋巴細(xì)胞開始出現(xiàn)減少;感染后2周,淋巴細(xì)胞進(jìn)一步減少,但在感染后4周,淋巴結(jié)中淋巴細(xì)胞數(shù)量有所恢復(fù)。2.成功建立了PCV2感染il10-/-型C57BL/6小鼠模型。在PCV2感染野生型C57BL/6小鼠中,檢測到PCV2病毒拷貝數(shù)在持續(xù)增加,而il10-/-型C57BL/6小鼠的肺組織病毒載量在感染后2周達(dá)到最高水平(**P0.01),而在感染后4周又急劇下降(P0.01),且顯著低于第1周的病毒載量(*P0.05)。western blotting檢測結(jié)果顯示,在PCV2感染的野生型小鼠和il10-/-型小鼠的肺臟、肝臟和下頜淋巴結(jié)中均有Cap蛋白的表達(dá)。il10-/-型小鼠在PCV2感染后肺臟的組織病理變化規(guī)律與野生型小鼠也基本相似,但是與野生小鼠相比,在PCV2接種后2周肺組織中炎性細(xì)胞浸潤更加顯著,而在PCV2接種后4周肺組織病變明顯減輕。3.PCV2感染后分別取野生型小鼠和il10-/-型小鼠肺臟和脾臟的單個(gè)核細(xì)胞,流式檢測結(jié)果如下:1)PCV2感染減少脾臟CD45+細(xì)胞,il10基因缺失能夠阻止感染后4周脾臟中CD45+細(xì)胞的減少,減少感染后2周肺組織中CD45+細(xì)胞數(shù)目和增加感染后4周肺組織中CD45+細(xì)胞數(shù)目;2)PCV2感染主要增加2周時(shí)脾臟CD3+CD4+T細(xì)胞和CD3+CD8+T細(xì)胞的數(shù)目和比例,il10基因缺失主要影響感染后4周脾臟中CD3+CD4+T細(xì)胞的數(shù)目,而在整個(gè)感染過程中對CD3+CD8+T沒有顯著影響;3)PCV2感染增加肺臟CD3+CD4+T細(xì)胞的數(shù)目和比例,而對CD3+CD8+T細(xì)胞數(shù)目無顯著影響,il10基因缺失使感染后2周肺組織CD3+CD4+T細(xì)胞數(shù)目和比例顯著高于野生型小鼠,同時(shí)使感染后2周肺組織CD3+CD8+T細(xì)胞數(shù)目/比例顯著高于Mock感染組和感染的野生型小鼠;4)PCV2感染不影響脾臟NK數(shù)目,il10基因缺失使感染后2周和4周脾臟NK細(xì)胞數(shù)目顯著增加,同時(shí)il10基因缺失使感染后2周肺組織NK細(xì)胞比例顯著減少、感染后4周又顯著增加;5)PCV2感染減少野生型小鼠脾臟中的B淋巴細(xì)胞數(shù)目和比例,il10基因缺失不能改變B淋巴細(xì)胞的這一變化趨勢;PCV2感染增加野生型小鼠肺臟中的B淋巴細(xì)胞數(shù)目,il10基因缺失也未能改變B淋巴細(xì)胞的這一變化趨勢。綜合以上結(jié)果,本研究工作成功建立了PCV2感染C57BL/6小鼠模型。通過比較PCV2感染的野生型小鼠模型和PCV2感染的il10-/-型小鼠模型,明確IL-10在PCV2感染后期機(jī)體清除感染病毒、肺組織慢性病變形成和淋巴細(xì)胞減少中所發(fā)揮的調(diào)控作用,確定IL-10缺失可使PCV2感染后期體內(nèi)的病毒量減少,組織病變減輕。研究結(jié)果明確了IL-10在調(diào)控PCV2感染后體內(nèi)T、B和NK細(xì)胞變化中的作用,為進(jìn)一步闡明PCV2感染豬機(jī)體免疫抑制的形成機(jī)制提供了新的理論依據(jù)。
[Abstract]:The expression of IL - 10 and IL - 10 in the peripheral blood and tissues of mice infected with PCV2 was detected by using flow cytometry . The results showed that IL - 10 could play an important role in the pathogenesis of PCV2 infection . The results showed that the number and proportion of CD3 + CD4 + T cells and the number and proportion of CD3 + CD4 + T cells in the spleen of infected mice were significantly higher than those of wild type mice infected by PCV2 infection .
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：S858.28

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Kirvis Torres-Poveda;Margarita Bahena-Román;Claudia Madrid-González;Ana I Burguete-García;Víctor Hugo Bermúdez-Morales;Oscar Peralta-Zaragoza;Vicente Madrid-Marina;;Role of IL-10 and TGF-β1 in local immunosuppression in HPV-associated cervical neoplasia[J];World Journal of Clinical Oncology;2014年04期

2 HABIB Mudasser;;Detection of PCV2 DNA by SYBR Green I-based quantitative PCR[J];Journal of Zhejiang University(Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal);2007年03期

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本文編號(hào)：1980668