本文選題：型豬鏈球菌 + 絲狀溫度敏感蛋白��； 參考：《中國人獸共患病學(xué)報》2017年03期

【摘要】：目的制備2型豬鏈球菌絲狀溫度敏感蛋白(Filamentous temperature-sensitive protein Z,FtsZ)重組蛋白并測定其水解三磷酸鳥苷(GTP)的酶活性。方法從2型豬鏈球菌中國強毒株05ZYH33基因組中PCR擴增目的基因ftsz,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET28a-ftsz,轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細胞,篩選陽性轉(zhuǎn)化子進行IPTG誘導(dǎo)表達,SDS-PAGE鑒定表達產(chǎn)物,Ni 2+親和層析柱純化重組蛋白,Western blot分析。重組蛋白免疫新西蘭兔后收集多抗血清,間接ELISA法檢測抗體效價,用孔雀綠-磷酸檢測法測定FtsZ重組蛋白的GTP酶活性。結(jié)果成功構(gòu)建pET28a-ftsz重組表達質(zhì)粒;純化獲得大量純度較高的FtsZ重組蛋白;ELISA檢測兔多抗血清效價達1∶13 107 200;Western blot顯示FtsZ重組蛋白能夠與His-Tag單抗和兔多抗血清發(fā)生反應(yīng);以GTP為底物檢測重組蛋白具有GTP酶活性。結(jié)論成功制備了具有GTP酶活性的2型豬鏈球菌FtsZ重組蛋白并以重組蛋白為抗原制備出高效價的多抗血清,為進一步研究2型豬鏈球菌FtsZ在細胞分裂調(diào)控過程中的作用奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to prepare the recombinant protein of Streptococcus suis type 2 filamentous temperature-sensitive protein zFtsZ and to determine the enzyme activity of its hydrolyzed guanosine triphosphate (GTP). Methods the target gene ftsz was amplified by PCR from the 05ZYH33 genome of Streptococcus suis type 2 Chinese virulent strain. The recombinant expression plasmid pET28a-ftsz was constructed and transformed into E.coli BL21DE3. The recombinant protein was purified by IPTG induced SDS-PAGE and purified by affinity chromatography with Ni2 affinity chromatography. After the recombinant protein was immunized with New Zealand rabbits, the polyantiserum was collected and the antibody titer was detected by indirect ELISA method. The GTP enzyme activity of FtsZ recombinant protein was determined by malachite green phosphoric acid assay. Results the recombinant expression plasmid of pET28a-ftsz was successfully constructed, and a large number of purified FtsZ recombinant proteins were purified. The titer of rabbit polyclonal antiserum detected by Elisa was 107,200 tons. The results showed that FtsZ recombinant protein could react with His-Tag monoclonal antibody and rabbit polyclonal antibody serum. GTP was used as the substrate to detect the GTP activity of the recombinant protein. Conclusion the recombinant protein of Streptococcus suis type 2 FtsZ with GTP enzyme activity was successfully prepared and the polyclonal antibody serum with high titer was prepared by using the recombinant protein as antigen, which laid a foundation for further study on the role of FtsZ type 2 in the regulation of cell division.
【作者單位】： 中國藥科大學(xué)中藥學(xué)院;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81571965,No.81471920) 江蘇省自然科學(xué)基金(No.BK20151091) 江蘇省333工程科研資助項目(No.BRA2014363)聯(lián)合資助~~
【分類號】：S852.611

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