發(fā)布時間：2018-06-04 00:43

  本文選題：腦心肌炎病毒 + 結(jié)構(gòu)蛋白VP��； 參考：《中國獸醫(yī)科學(xué)》2017年03期

【摘要】：為構(gòu)建腦心肌炎病毒(EM CV)VP1基因的重組腺病毒,以期為EMCV疫苗研制提供試驗依據(jù)。擴增EMCV VP1基因并與載體p Yr-adshuttle-4連接構(gòu)建p Yr-ads-4-VP1穿梭載體;穿梭質(zhì)粒通過體外重組與腺病毒載體進行重組,獲得p Ad-VP1-EG FP重組腺病毒載體,將此載體于H EK 293細胞中包裝最終成功獲得r Ad-VP1-EGFP重組腺病毒,并測定其TCID50;構(gòu)建的重組腺病毒感染細胞后在基因水平、蛋白水平對VP1進行檢測;最后通過對小鼠免疫重組腺病毒后進行EMCV攻毒試驗,驗證其免疫效果。結(jié)果顯示,成功構(gòu)建了EMCV VP1基因重組腺病毒r Ad-VP1-EGFP,測得其TCID50為10-8.5/m L;感染細胞后基因水平及蛋白水平均可檢測到VP1基因的表達;重組腺病毒免疫小鼠后的存活情況表明,重組腺病毒對小鼠有較好的免疫效果,且二次免疫后保護率顯著高于單次免疫。結(jié)果表明,本試驗成功制備了EMCV基因重組腺病毒,且對小鼠具有較好的免疫效果,可為進一步開發(fā)EMCV基因工程疫苗奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:To construct recombinant adenovirus of EM CV)VP1 gene of encephalitis virus, and to provide experimental basis for the development of EMCV vaccine. The EMCV VP1 gene was amplified and ligated with the vector p Yr-adshuttle-4 to construct the p Yr-ads-4-VP1 shuttle vector. The recombinant adenovirus vector of p Ad-VP1-EG FP was obtained by in vitro recombination of the shuttle plasmid with the adenovirus vector. The recombinant adenovirus was successfully packaged in HEK293 cells to obtain r Ad-VP1-EGFP recombinant adenovirus, and its TCID50 was determined. The recombinant adenovirus was infected with the recombinant adenovirus at gene level and protein level, and VP1 was detected at the gene level and protein level. Finally, the mice were immunized with recombinant adenovirus by EMCV attack test to verify its immune effect. The results showed that the recombinant adenovirus r Ad-VP1-EGFP of EMCV VP1 gene was successfully constructed, and its TCID50 was 10-8.5 / mL. The expression of VP1 gene could be detected by gene level and protein level after infection. The recombinant adenovirus had a better immune effect on mice, and the protective rate after secondary immunization was significantly higher than that of single immunization. The results showed that the recombinant adenovirus of EMCV gene was successfully prepared in this experiment, and it has a good immune effect on mice, which can lay a foundation for the further development of EMCV gene engineering vaccine.
【作者單位】： 西北民族大學(xué)生物工程與技術(shù)國家民委重點實驗室;西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院;甘肅省軍區(qū)甘南州軍分區(qū);甘肅省動物細胞工程技術(shù)研究中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31460665) 教育部“長江學(xué)者和創(chuàng)新團隊發(fā)展計劃”項目(IRT13091) 中央高校基本科研業(yè)務(wù)費專項資金項目(31920150030,3192015005,Zy P2015005)
【分類號】：S852.65

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本文編號：1975027