本文選題：東方次睪吸蟲(chóng) + 線粒體全基因組　； 參考：《黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：東方次睪吸蟲(chóng)（Metorchis orientalis）是主要寄生于鴨、雞和野生鳥(niǎo)類等禽類膽囊和膽管內(nèi)的一種吸蟲(chóng)，引起膽囊高度腫大、膽囊和膽管壁增厚發(fā)硬、膽道堵塞和膽汁不能暢流等病理變化，導(dǎo)致食欲下降、體重減輕、消瘦、貧血和腹瀉等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可以引起死亡，對(duì)養(yǎng)業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。同時(shí)，東方次睪吸蟲(chóng)還可以感染人，但報(bào)道卻很少，由于東方次睪吸蟲(chóng)和華支睪吸蟲(chóng)具有相同的中間宿主、流行區(qū)域和臨床癥狀，因此，，東方次睪吸蟲(chóng)很可能是一種被忽視的人獸共患寄生蟲(chóng)。 目前對(duì)東方次睪吸蟲(chóng)的研究相對(duì)較少，主要集中在蟲(chóng)體形態(tài)結(jié)構(gòu)、生活史和流行病學(xué)等方面。關(guān)于分子方面的研究，僅見(jiàn)部分核糖體的報(bào)道。線粒體是研究寄生蟲(chóng)分子分類、群體遺傳和系統(tǒng)發(fā)生的重要基因標(biāo)記，因此本課題的第一部分內(nèi)容是，擴(kuò)增東方次睪吸蟲(chóng)的線粒體全基因組，對(duì)獲得的線粒體全基因組序列進(jìn)行分析，并基于線粒體蛋白質(zhì)編碼基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)，探討東方次睪吸蟲(chóng)與其它吸蟲(chóng)的親緣關(guān)系，確定其在吸蟲(chóng)中的分類地位。結(jié)果，東方次睪吸蟲(chóng)線粒體全基因組為環(huán)形，全長(zhǎng)為13,834bp，包含36個(gè)基因，即12個(gè)蛋白編碼基因、22個(gè)tRNA、2個(gè)rrnA還有2個(gè)非編碼區(qū)。蛋白編碼基因排列順序與梟形目以外大部分吸蟲(chóng)一致，所有的基因沿著一個(gè)方向轉(zhuǎn)錄。將12個(gè)蛋白編碼基因串聯(lián)起來(lái)，以三代蟲(chóng)為外群，采用BI、MP和ML三種方法構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)的結(jié)果相似。進(jìn)化樹(shù)中，后睪科、片形科、異形科、并殖科、同盤科、雙腔科和裂體科各自形成單分支。后睪科由東方次睪吸蟲(chóng)、麝貓后睪吸蟲(chóng)、華支睪吸蟲(chóng)和貓后睪吸蟲(chóng)構(gòu)成，其中的后睪屬的兩種吸蟲(chóng)（麝貓后睪吸蟲(chóng)和貓后睪吸蟲(chóng)）并不在同一分支上，東方次睪吸蟲(chóng)和麝貓后睪吸蟲(chóng)的親緣關(guān)系較貓后睪吸蟲(chóng)和華支睪吸蟲(chóng)近。 關(guān)于東方次睪吸蟲(chóng)感染的檢測(cè)方法主要是檢查糞便中的蟲(chóng)卵，對(duì)于形態(tài)相似的吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵很容易造成誤判。因此，急待一種快速的檢測(cè)方法。因此，本課題的第二部分內(nèi)容是根據(jù)GenBank中發(fā)表的東方次睪吸蟲(chóng)ITS序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物，PCR擴(kuò)增糞便樣品中蟲(chóng)卵DNA，通過(guò)特異性\敏感性和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，建立了一套快速檢測(cè)東方次睪吸蟲(chóng)感染的方法。結(jié)果，陽(yáng)性樣品可擴(kuò)增得到260bp的特異性條帶，該方法檢測(cè)華支睪吸蟲(chóng)、卷棘口吸蟲(chóng)、纖細(xì)背孔吸蟲(chóng)DNA樣品均為陰性，該方法所能檢測(cè)到的最低蟲(chóng)卵數(shù)為0.03125個(gè)/克糞便。臨床檢測(cè)87份鴨糞樣本發(fā)現(xiàn)，6份為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為6.9%。結(jié)果表明在大慶周邊地區(qū)鴨子有東方次睪吸蟲(chóng)感染。本實(shí)驗(yàn)建立的PCR檢測(cè)方法具有較高的特異性和靈敏性，可以用于鴨等禽類東方次睪吸蟲(chóng)病的診斷。 本研究獲得了東方次睪吸蟲(chóng)線粒體全基因，豐富了吸蟲(chóng)的線粒體基因組資料；并通過(guò)進(jìn)化分析，確定了東方次睪吸蟲(chóng)在吸蟲(chóng)中的分類地位及與其它吸蟲(chóng)的親緣關(guān)系；同時(shí)建立了一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的檢測(cè)東方次睪吸蟲(chóng)感染的PCR方法，為東方次睪吸蟲(chóng)流行病學(xué)調(diào)查和臨床診斷奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Metorchis orientalis is a kind of worm which is mainly parasitic in the gallbladder and bile duct of birds such as ducks , chickens and wild birds , and causes diseases such as enlarged gallbladder height , thickened gallbladder and bile duct wall , obstruction of biliary tract and bile flow , etc .

In the present study , there are few studies on molecular biology , such as morphological structure , life history and epidemiology . The first part of this project is to study the molecular classification , population genetics and the important genetic marker of the system .

The second part of this study is to design a pair of specific primers based on the ITS sequence of Oriental chiorchis sinensis published in GenBank . The results show that the positive rate is 0 . 03125 / g . The results show that the positive rate is 0 . 03125 / g . The results show that the detection method has high specificity and sensitivity , and can be used in the diagnosis of the Oriental chidism of birds and other birds .

In this study , the mitochondrial genome - wide gene of clonorchiasis was obtained , and the mitochondrial genome information was enriched .
By the evolutionary analysis , the taxonomic status of the clonorchiasis and its relationship with other insects were determined .
At the same time , a PCR method with high sensitivity , strong specificity and good repeatability was established , which laid the foundation for the epidemiological investigation and clinical diagnosis of the Oriental chidism .
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1972109