本文選題：藍舌病毒 + VP基因�。� 參考：《中國獸醫(yī)科學》2017年05期

【摘要】：本試驗首先利用RT-PCR技術擴增獲得了藍舌病毒1型(BTV1)的VP6基因,然后將其克隆到表達載體pPRoEx-HTb上,構建重組表達質粒pPro-VP6,轉化大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞后用IPTG誘導表達,優(yōu)化表達條件,純化重組表達的VP6蛋白,免疫新西蘭白兔制備抗VP6蛋白的多克隆抗體,利用Western-blot和細胞免疫熒光試驗檢測抗體的特異性及VP6蛋白在BTV1感染細胞中的分布。結果顯示,重組VP6蛋白在大腸桿菌中以包涵體的形式表達,利用組氨酸標簽純化樹脂獲得了高純度的VP6蛋白;制備的抗VP6多克隆抗體不僅可與重組表達的VP6蛋白反應,而且可與BTV1感染細胞中的天然VP6蛋白發(fā)生特異性反應;在BTV1感染的BHK21細胞中檢測到了VP6蛋白的特異表達,且分布于整個細胞質中。本研究成功表達了BTV重組VP6蛋白并制備了相應的特異抗體,為進一步揭示VP6蛋白的特性和功能奠定了基礎。
[Abstract]:In this experiment, the VP6 gene of blue tongue virus type 1 (BTV1) was amplified by RT-PCR technique, and then cloned into the expression vector pPRoEx-HTb. The recombinant expression plasmid pPro-VP6 was constructed. The recombinant plasmid pPro-VP6 was transformed into Escherichia coli BL21 receptive cells, and the expression conditions were optimized by IPTG. The recombinant VP6 protein was purified and the polyclonal antibody against VP6 protein was prepared by immunizing New Zealand white rabbits. The specificity of the antibody and the distribution of VP6 protein in BTV1 infected cells were detected by Western-blot and cellular immunofluorescence assay. The results showed that the recombinant VP6 protein was expressed as inclusion body in E. coli and purified with histidine label resin to obtain high purity VP6 protein, and the polyclonal antibody against VP6 could not only react with the expressed VP6 protein. The specific expression of VP6 protein was detected in BTV1 infected BHK21 cells and distributed in the whole cytoplasm. In this study, the recombinant VP6 protein of BTV was successfully expressed and the corresponding specific antibody was prepared, which laid a foundation for further revealing the characteristics and functions of VP6 protein.
【作者單位】： 甘肅農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院;中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學國家重點實驗室;江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【基金】：甘肅省國際科技合作專項(1504WKCA056) 國家自然科學基金項目(31672562)
【分類號】：S852.65

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本文編號：1967835