本文選題：ALV-J + 先天感染　； 參考：《山東農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：禽白血病(Avian Leucosis,AL)是由禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)和禽肉瘤病毒(Avian Sarcoma Virus,ASV)群中的病毒感染引起的多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱。根據(jù)病毒與宿主特異性相關(guān)的gp85蛋白抗原性的差異以及交叉中和試驗(yàn)等,將禽白血病病毒分為A、B、C、D、E和J等亞群,其中商品雞群中以J亞型(ALV-J)的致病性和感染性最強(qiáng)。該病主要通過(guò)先天感染和水平接觸感染傳播,在蛋雞、肉雞以及我國(guó)地方品系雞群中都有發(fā)生,造成雞群免疫抑制、腫瘤性死亡,繼發(fā)感染等危害,給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。由于ALV-J基因序列的復(fù)雜性及其抗原變異性,到目前為止還缺乏有效的疫苗和藥物,只能通過(guò)種群凈化控制該病。但由于養(yǎng)殖管理不規(guī)范,凈化不徹底等原因,該病在養(yǎng)禽地區(qū)的傳播依舊普遍,特別是在發(fā)展中國(guó)家。因此,亟需探索新的方法控制ALV的感染和散播。泰山松花粉多糖(Taishan pinus pollen polysaccharide,TPPPS)是一種天然植物大分子,本實(shí)驗(yàn)室之前的研究表明TPPPS具有很好的免疫增強(qiáng)和抗病毒活性,并可以抑制B亞群禽白血病病毒的體外復(fù)制。然而,TPPPS是否可以抑制J亞型禽白血病病毒的感染,目前尚不清楚。本研究的重點(diǎn)是探討TPPPS對(duì)ALV-J感染的抑制作用及其作用機(jī)制。首先檢測(cè)了泰山松花粉多糖體外抑制ALV-J的活性和能力,然后通過(guò)透射電鏡進(jìn)一步觀察了TPPPS與ALV-J粒子之間的相互作用來(lái)揭示TPPPS干擾病毒吸附的可能機(jī)制;其次,試驗(yàn)中人工構(gòu)建了一個(gè)先天感染ALV-J雛雞模型來(lái)檢測(cè)TPPPS的體內(nèi)抗病毒效果;最后,試驗(yàn)評(píng)估了TPPPS對(duì)急性致瘤性ALV-J感染的作用效果。本研究分以下三部分內(nèi)容:1.TPPPS體外抗ALV-J的活性及其機(jī)制分析1.1 TPPPS體外抗病毒活性為了驗(yàn)證TPPPS的體外抗ALV-J特性,檢測(cè)了TPPPS對(duì)ALV-J在DF-1細(xì)胞上的復(fù)制能力的影響,且比較了TPPPS作用在病毒感染不同時(shí)期時(shí)的作用效果。結(jié)果顯示,TPPPS可以明顯抑制ALV-J的體外增殖,并且在病毒感染吸附期的作用效果最佳。1.2透射電鏡(TEM)試驗(yàn)為了探究TPPPS干擾病毒吸附的作用方式,用透射電鏡觀察了TPPPS對(duì)ALV-J吸附DF-1細(xì)胞的影響。結(jié)果顯示TPPPS能明顯減少DF-1細(xì)胞膜表面處于膜融合狀態(tài)及進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的病毒粒子數(shù)量。說(shuō)明TPPPS減少了病毒對(duì)細(xì)胞的吸附和感染。隨后又通過(guò)負(fù)染觀察來(lái)TPPPS與ALV-J粒子的相互作用。發(fā)現(xiàn)TPPPS與ALV-J粒子混合后,會(huì)明顯影響ALV-J粒子的形態(tài)和分布,病毒粒子呈現(xiàn)不規(guī)則形態(tài),并且發(fā)生聚集。這證明TPPPS與ALV-J病毒粒子確實(shí)發(fā)生了直接作用。2.TPPPS對(duì)先天感染ALV-J雞的免疫調(diào)理及抗病毒作用研究2.1 ALV-J先天感染雛雞模型的建立ALV-J的主要傳播方式為通過(guò)種雞經(jīng)雞蛋(胚)向下一代垂直傳播,引起出殼后的雛雞免疫抑制,呈現(xiàn)持久的病毒血癥,生產(chǎn)性能下降。本研究選用7胚齡雞胚卵黃囊接種不同濃度(101、102、103、104 TCID50)的ALV-J,比較其孵化率。選取保證所有雛雞孵化的最高病毒劑量(103 TCID50)作為構(gòu)建先天感染雛雞模型的病毒接種劑量。2.2 TPPPS對(duì)先天感染ALV-J雞的體內(nèi)抗病毒作用研究研究表明TPPPS對(duì)ALV-B有很好的抗病毒活性。本研究通過(guò)給予先天感染ALV-J雛雞TPPPS作用,分析多糖對(duì)ALV-J的體內(nèi)抗病毒作用。結(jié)果顯示,TPPPS作用后的雛雞泄殖腔排毒量明顯下降,且排毒的開(kāi)始時(shí)間延遲了接近一個(gè)周。這對(duì)減輕ALV-J的水平傳播具有重大的意義。同時(shí),TPPPS還降低了免疫器官的帶毒量,減輕了病毒對(duì)免疫器官的損傷。這表明TPPPS在先天感染ALV-J雞體內(nèi)同樣具有顯著的抗病毒活性。2.3 TPPPS對(duì)先天感染ALV-J雞的免疫調(diào)理作用研究試驗(yàn)證明,TPPPS可以增強(qiáng)機(jī)體免疫力,對(duì)環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的免疫抑制小鼠有免疫恢復(fù)作用。ALV-J的先天感染引起雞體明顯的免疫抑制,而TPPPS調(diào)理后雞體的免疫狀況明顯改善,具體表現(xiàn)為體重和免疫器官指數(shù),外周血淋巴細(xì)胞增殖率,淋巴細(xì)胞數(shù)量,細(xì)胞因子的分泌和ND抗體的水平等各項(xiàng)免疫指標(biāo)均有明顯的提高。說(shuō)明TPPPS可以作為一種免疫增強(qiáng)劑,以減輕ALV-J先天感染造成的免疫抑制現(xiàn)象。3.TPPPS對(duì)感染急性致瘤性ALV-J雞的抗腫瘤作用研究Fu-J病毒是一種ALV-J相關(guān)的急性致瘤性病毒,可以快速引起感染雞的腫瘤。為了探究TPPPS對(duì)ALV-J引起腫瘤的抑制作用,選取7日齡雛雞頸部皮下接種Fu-J病毒,并于接種前和/或接種后給予連續(xù)的TPPPS給藥,之后每天觀察感染雞的臨床癥狀,腫瘤的生長(zhǎng)狀況及死亡率情況等。結(jié)果顯示,多糖在病毒接種前的預(yù)處理可以在一定程度上延遲腫瘤的發(fā)生,抑制腫瘤的生長(zhǎng)。
[Abstract]:Avian leukosis virus ( TPPPS ) is a kind of natural plant macromolecule . It has been shown that TPPPS can inhibit the infection and spread of ALV - J . The effect of TPPPS on ALV - J was studied by TEM . The effect of TPPPS on ALV - J was studied .
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.65

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本文編號(hào)：1960256