本文選題：牛種布魯氏菌2308 + 缺失株　； 參考：《石河子大學》2015年碩士論文

【摘要】：布魯氏菌是一種革蘭氏陰性胞內寄生菌,對人和動物易感,近些年,我國布病的發(fā)病率正在呈上升趨勢,對經濟和健康帶來了嚴重的危害,但是現(xiàn)有疫苗仍然存在一定缺陷,為了能夠研制出一種新型疫苗,本試驗采用傳統(tǒng)的物理方法對牛種布魯氏菌2308缺失株進行誘變,缺失株為本試驗室所構建,將2308△ery、2308△wbkA、2308△omp25缺失株在37℃搖床中培養(yǎng)至OD值為0.6左右,用PBS稀釋至10-3后,用移液器吸取50μL在布魯氏菌固體培養(yǎng)基上涂勻,然后在紫外燈下30cm處分別照射0min、4min、6min、8min、10min后放入37℃恒溫培養(yǎng)箱3~5d,挑取單菌落,至此為第一代,共誘變20代,然后送至中國疾控中心進行生化鑒定。為了檢測牛種布魯氏菌2308紫外誘變株毒力和免疫效果,本試驗以S19疫苗株為對照,用牛種布魯氏菌基因缺失株紫外線照射組(2308△rwbkA、2308△romp25、和2308△rery)和非照射組(2308△wbkA、2308△omp25、和2308△ery)分別侵染小鼠巨噬細胞RAW264.7,對小鼠巨噬細胞內的細菌進行計數(shù)評價毒力致弱情況;用牛種布魯氏菌基因缺失株紫外照射組、非照射組以及S19疫苗株分別以1×107CFU/0.2mL免疫4~6周齡昆明系小鼠,通過ELISA檢測小鼠血清中布魯氏菌IgG抗體和IFN-γ細胞因子,同時分離脾臟,CFU計數(shù)布魯氏菌胞內菌數(shù)量;用2308強毒株以3×108CFU/0.2mL腹腔感染各組免疫10周后小鼠,脾臟CFU評價各受試組小鼠的免疫效果。結果表明:在細胞水平,紫外線照射后的布魯氏菌基因突變株其CFU較紫外線非照射組有不同程度的下降,統(tǒng)計學分析無顯著性差異(P0.05),但均高于S19胞內菌CFU;與S19疫苗株相比,2308△rwbkA和2308△rery紫外線照射組與其對應的2株紫外線非照射組在不同檢測階段,其IgG和IFN-γ含量水平相當,但2308△romp25紫外線照射菌株組在第6、8周,其IgG和IFN-γ含量均高于2308△omp25紫外線非照射菌株組和S19免疫組,統(tǒng)計學分析有顯著性差異(0.01P0.05);攻毒試驗表明:經過紫外照射的romp25缺失株產生的保護力高于其它未經過紫外照射的缺失株,但低于S19疫苗株免疫效果。結論:紫外誘變株romp25毒力進一步降低而且能夠產生一定的保護效果。
[Abstract]:Brucella is a Gram-negative intracellular parasite, susceptible to human and animal diseases. In recent years, the incidence of brucellosis in China is on the rise, which has brought serious harm to economy and health, but the existing vaccines still have some defects. In order to develop a new vaccine, the traditional physical method was used to mutagenic the 2308 deletion strain of Brucella bovis, which was constructed in our laboratory. The missing strain of 2308 liter 2308 wbkAn 2308 omp25 was cultured in 37 鈩，

本文編號：1948467